%d0%ba%d0%bb%d1%8f%d0%ba%d1%81%d0%b0 PNG образ | Векторы и PSD-файлы

дизайн плаката премьера фильма кино с белым вектором экрана ба

1200*1200

чат комментарий образование синий значок на абстрактных облако сообщение

5556*5556

набор векторных иконок реалистичные погоды изолированных на прозрачной ба

800*800

Ручная роспись борода ба zihu большая борода

1200*1200

но логотип компании вектор дизайн шаблона иллюстрация

4083*4083

bb крем элемент

1200*1200

стрелка

5556*5556

милый слоненок сидит на облаке

5001*5001

пример с австралией праздник плакат или баннер

1200*1200

ма дурга лицо индуистский праздник карта

5000*5000

Векторная иллюстрация мультфильм различных овощей на деревянном ба

800*800

вектор поп арт иллюстрацией черная женщина шопинг

800*800

ба конфеты шоколад

800*800

естественный цвет bb крем цвета

1200*1200

ценю хорошо как плоская цвет значок векторная icon замечания

5556*5556

3d модель надувной подушки bb cream

2500*2500

вектор поп арт иллюстрацией черная женщина шопинг

800*800

цвет перо на воздушной подушке bb крем трехмерный элемент

1200*1200

Косметический bb Крем Дизайн Плаката косметический Косметика постер Реклама косметики Плакат

3240*4320

Красивая розовая и безупречная воздушная подушка bb крем косметика постер розовый красивый розовый Нет времени На воздушной

3240*4320

сердце сердцебиение любовь свадьба в квартире цвет значок векторная icon

5556*5556

коробка и объектив камеры значок дизайн вдохновение изолирован на белом ба

1200*1200

аэрозольный баллончик увлажняющий лосьон bb cream парфюм для рук

3072*4107

Крутая музыка вечеринка певца креативный постер музыка Я Май Ба концерт вечер К

3240*4320

индийский фестиваль счастливого карва чаут каллиграфия хинди текст ба

5041*5041

Головной мозг гипноз психология синий значок на абстрактное облако ба

5556*5556

малыш парень им значок на прозрачных ба новорожденного весы вес

5556*5556

bb крем ню макияж косметика косметика

1200*1500

аркада консоли игры машина играть в соответствие значок на прозрачных ба

5556*5556

кодер кодирование компьютер список документ линии значок на прозрачных ба

5556*5556

happy singing mai ba sing self indulgence happy singing

2000*2000

новые facebook покрытия с red lion и черный и синий полигональной ба

5556*5556

концепция образования в выпускном вечере баннер с цоколем и золотой ба

6250*6250

простая инициализация bb b геометрическая линия сети и логотип цифровых данных

2276*2276

чат пузыри комментарии разговоры переговоры аннотация круг ба

5556*5556

Шань Хай Цзин Ба змея Отличный зверь монстр

2000*2000

студент отмечает что примечание образования плоский цветной значок вектора значок ба

5556*5556

розовый бб крем красивый бб крем ручная роспись бб крем мультфильм бб крем

2000*3000

пример с австралией праздник плакат или баннер

1200*1200

пример с австралией праздник плакат или баннер

1200*1200

две бутылки косметики жидкая основа белая бутылка крем bb

2000*2000

99 имен аллаха вектор al baith асма husna

2500*2500

Счастливого Дивали традиционного индийского фестиваля карта с акварелью ба

5041*5041

церковь

5556*5556

bb кремовый плакат белый макияж косметический На воздушной подушке

3240*4320

геймпад playstation квартиру цвет значок векторная icon видеоигра

5556*5556

деньги долг финансы помочь кредит им значок на прозрачных ба

5556*5556

в поход местонахождение им значок на прозрачных ба карта план трек

5556*5556

жидкая подушка крем bb

1200*1200

bb крем ню макияжа постер Новый список преимущественный колос День святого

3240*4320

Кляксы на фотографии после печати

 

Сегодня мы научимся исправляться с таким дефектом, как кляксы на изображении, как будто кто-то капнул на лист чернил. Не спутайте этот дефект с черными полосами или грязными углами. В рассматриваемом случае, кляксы имеют форму круглую или чаще близкую к эллипсу, не имеют четких краев и могут располагаться в любом месте листа. Иногда кляксы могут иметь не грязно-черный цвет, а совпадать с цветом одного из картриджей, используемых в вашем принтере. 

 

Единственной причиной появления клякс является повышенное давление в печатающей головке. А давление в печатающей головке определяется вашими картриджами или емкостями. Поэтому список возможных источников повышенного давления не очень велик:

1. Емкости стоят выше принтера. Это самая частая причина. Емкости системы непрерывной подачи чернил должны располагаться на одном уровне с принтером (стоять на том же столе или полке, где стоит принтер). Часто по незнанию или забывчивости (например, мыл стол, временно переставил емкости и забыл, или стол мыла уборщица, которая и не подозревала, что емкости нельзя поднимать и т.д. и т.п.). Закрепите емкости скотчем сбоку или сзади принтера — вот лучший выход (который заодно гарантирует, что никто не уронит эти емкости).

2. Чернила должны находиться только в больших отсеках системы непрерывной подачи чернил. В маленьких отсеках должно быть не больше 0,5-1 см чернил. Чернила попадают в маленькие емкости опять же по незнанию (некоторые так их сразу и заправляют) или случайно. Например, если уронить емкости на стол, то они возможно не прольются, но в маленькие емкости часть чернил перетечет наверняка. Также чернила перетекут, если забыть заткнуть маленькое отверстие на емкости, или если заглушка выскочила (иногда кто-то нечаянно может помочь ей). Способ борьбы как и в пункте 1: зафиксируйте емкости. И еще: по возможности расположите их так, чтобы чьи-либо шаловливые ручки как можно реже оказывались рядом с емкостями. Еще одной причиной перетекания чернил в маленькие емкости может быть дефект системы (очень, к счастью, редкий), а также такая банальная неаккуратность при заправке: высохшая краска на краях отверстия может не давать заглушке плотно закрыться и при казалось бы закрытой заглушке она будет пропускать воздух и чернила будут перетекать в маленькую емкость. Тут стоит вспомнить фундаментальное правило струйных принтеров: «чистота — залог здоровья»! 

Чтобы удалить чернила из маленьких емкостей возьмите шприц без иглы, вытяните поршень в крайнее верхнее положение, закройте большое отверстие заглушкой, а маленькое откройте. Вставьте шприц в отверстие маленькой емкости, откройте отверстие большой емкости и опустите поршень. После этого закройте большое отверстие и выньте шприц. Если необходимо, повторяйте, пока все чернила не уйдут из маленькой емкости. Не перепутайте последовательность действий! Если вы нажмете поршень, не открыв большую емкость, вы можете повредить печатающую головку! Поэтому никогда не давите, если чувствуете сильное сопротивление движению поршня. 

 

 

3.   Если вы используете перезаправляемые картриджи, то проверьте, закрыты ли заправочные отверстия заглушками (помните также о том, что налипшая краска может сделать заглушки «неработающими»). Если с заглушками все в порядке, вы столкнулись с дефектным картриджем и его необходимо заменить.

На этом в общем-то заканчиваются причины, почему принтер может оставлять кляксы. Остается добавить, что  кляксы грязно черного цвета свидетельствуют о том, что проблема со всеми или несколькими емкостями, а если кляксы имеют определенный цвет, то следует внимательно осмотреть емкости (или картриджи) соответствующего цвета.

Студия Клякса #1926 | Bash Today

Самый яркий зал, подойдет как для свадебной и семейной фотосъемки, так и для съемок телепередач. Яркие кляксы, качели, красное кафе, витраж, уникальные фоны создадут неповторимое настроение на любом корпоративе, дне рождении, девичнике/мальчишнике или детском празднике.

Минимальное время аренда 2 часа
Предоплата 50%
Оборудование
Площадь 75 кв.м
Яркая уникальная клякса из 5 цветов
Красное кафе со столиком
Качели на цепях, выдерживают массу 2-х взрослых человек
Каменная кладка с состаренными дверями и переходом в готическую крепость с витражом и гаргульей
2 окисленных фона: ржавчина и бронза
3 моноблока Profoto D1 500 Air (дополнительные источники по предварительному запросу). Стоимость дополнительного источника 100р/час

Всевозможный набор насадок, стойки, журавли, отражатели
Air remote 1шт
Фоны различных цветов (уточняйте по телефону нужные цвета) – 500р/м загрязненного фона
Оборудованное передвижное место для 2-х визажистов, зал можно использовать как гримерку перед съемкой за 50% стоимости зала
Рейл для одежды
Активные колонки, к которым, по желанию, можно подключить свою технику (ноутбук, плеер и т.п.)
2 стола для мероприятий
20 стульев для семинаров
Бесплатный Wi-Fi
Дополнительное оборудование
Дополнительный источник Profoto D1 500 Air 100р/час, 1000р/смена
Отпариватель 100р/час, 500р/смена

Вентилятор тунельный 100р/час, 500р/смена
Фильтры цветные 200р/смена
Штатив 500р/смена
Дополнительный гримерный стол 500р/смена
Генератор дыма 200р/час, 1000р/смена
Генератор мыльных пузырей 300р/час, 1500р/смена (до 2л жидкости за смену)
Генератор снега 1000р/час , 5000р/смена
Услуги для съемки
Помощник на съемке 1000р/час, смена 10 часов 8000р
Настройка оборудования перед съемкой 500р
Постановка световой схемы 500р
Фотограф от 3000р/час
Обработка фотографий от 300р/шт
Оператор от 5000р/час, от 30000р/смена
Визажист от 4000р/час
Стилист от 4000р/образ
Для Семинаров:
Проектор 2000р
Флипчарт 500р ( бумага дополнительно 500р)
Дополнительный стол 500р
Дополнительный стул 50р
Кофе брейки от 500р/чел ( не менее 10000р)
Для мероприятий
Уборка от 2000р
DJ + Оборудование от 15000р ( до 6 часов, далее от 3000р/час)
Бармен 5000р ( до 6 часов, далее от 1000р/час)
Официант 5000р ( до 6 часов, далее 1000р/час)
Анимация по запросу
Кейтеринг от нашего Шеф повара от 1500р/человек (не менее 20000р)

Читать дальше

Оставьте запрос для уточнения всех деталей. Вы получите SMS-сообщение с номером телефона менеджера площадки, который будет рад ответить на любые вопросы.

«Пятна, кляксы и портреты». К 90-летию со дня рождения З. Я. Корогодского

Главное здание Театрального музея им. А.А. Бахрушина

«Способность театра вызвать в вас чувство и через это чувство пробудить какой-то новый уровень отношения к жизни… Эта способность театра самая сильная».

З. Я. Корогодский

Театральный музей им. А. А. Бахрушина и Данила Корогодский, сын выдающегося театрального режиссёра Зиновия Корогодского, представляют выставку «Пятна, кляксы и портреты» к 90-летию со дня рождения народного артиста России З. Я. Корогодского /1926-2004/.

Выставка-посвящение, выставка «отдающая долг»… «Сын рисует жизнь отца», как говорит сам Данила Корогодский… Обращение к современникам, представленное через ироническую призму большой и драматической судьбы, которую не смогла сломать система, наказывающая за инакомыслие.

23 февраля 1962 г. Ленинградский театр юных зрителей /ТЮЗ/. На должность главного режиссёра театра назначают Зиновия Яковлевича Корогодского. Последующие 25 лет он будет возглавлять театр, за несколько лет ставший лучшим детским театром СССР в 1960-х—1970-х гг. и наравне с БДТ Г. А. Товстоногова определивший культурный облик Ленинграда. Это потом, в 1980-х гг., напряжение в отношениях главного режиссёра с партийным руководством достигнет критической точки, и в апреле 1986 г. произойдет трагический поворот в его жизни: его лишат возможности работать, учить, у него отнимут театр… А до тех пор Ленинградский ТЮЗ Зиновия Корогодского объединит талантливых актёров, режиссёров, композиторов, выдающихся писателей и художников, создавших вместе с ним театр для зрителей «от семи до семидесяти».

Зиновия Корогодского называли «культурным диссидентом», но он никогда не входил в  оппозиционное движение.  «Театр – моё заблуждение, моя вера, вся моя жизнь», – говорил режиссёр, первую же постановку на сцене Ленинградского ТЮЗа посвятив новаторской повести «Коллеги» Василия Аксёнова.

Юрий Каморный, Булат Окуджава, Александр Хочинский, Олег Ефремов, Антонина Шуранова, Василий Аксёнов, Белла Ахмадулина, Михаил Рощин, супруга Людмила Данилина, Яков Гордин, Вениамин Фильштинский, Ольга Волкова, Лев Додин, Георгий Тараторкин… Все они «действующие лица» в жизни режиссёра. На выставке Данила Корогодский постарался в деталях воссоздать эпоху, которая окружала отца. Знаменитые друзья и ученики, герои спектаклей, известные деятели тех лет, запечатлённые на фотографиях и рисунках, «взирают» со стен выставочных залов, а хаотично «разбросанные» по стенам надписи стали «записками на манжетах» от имени Зиновия Корогодского.

Около 50 рисунков, созданных Данилой Корогодским специально к выставке, являются не просто изображениями, а биографическими сюжетами. Эти «сюжеты», по замыслу  Данилы Корогодского, строятся вокруг копии рабочего кабинета отца в натуральную величину, в центре – стол из его кабинета в Ленинградском ТЮЗе.

…В сентябре 1986 г. дело Зиновия Корогодского было закрыто за отсутствием состава преступления с возвращением всех званий. Зиновий Корогодский успеет поработать в детском театре Гонолулу в США, стать заведующим кафедрой режиссуры и актёрского искусства в Гуманитарном университете профсоюзов в Санкт-Петербурге. В 1991 г. режиссёр создаст творческий центр «Семья» и «Театр Поколений», которым ныне руководит его сын Данила Корогодский. В Ленинградский ТЮЗ Зиновий Корогодский больше никогда не зайдёт.

«У меня нет гневных чувств в адрес прошлого. Я оцениваю его с печалью, но боль моя не о прошлом, а о будущем: будем ли мы жить по-человечески, действительно свободно…»

З. Я. Корогодский

Выставка «Пятна, кляксы и портреты» будет открыта до 11 декабря 2016 г.

Видеоролик выставки «Пятна, кляксы и портреты» /автор Алексей Маслодудов/.

Перец Клякса: описание сорта, отзывы, фото, урожайность

Описание сладкого перца Клякса, отзывы, фото

Среднеспелый, крупноплодный, урожайный сорт сладкого перца. Рекомендован для выращивания в открытом грунте и пленочных теплицах. От всходов до начала плодоношения проходит 120-130 дней.

Куст полураскидистый, высотой до 1 метра. Лист среднего размера, зеленый, слабоморщинистый.

Сорт болгарского перца Клякса включен в Госреестр по Российской Федерации в 2010 году.

Характеристика плодов

перец Клякса в технической спелости

Плоды пониклые, конусовидные, глянцевые, в стадии технической спелости фиолетовые, в биологической — красные, весом 120-200 грамм, отличного вкуса без горечи. Толщина стенки 6 мм. Эти перцы подходят для свежего употребления, фарширования, приготовления лечо, заморозки.

Урожайность: до 3,5 кг/кв.м (при соблюдении агротехники).

к содержанию ↑

Особенности выращивания, посадка и уход

фото Анастасии Седовой

Посев на рассаду проводят в конце февраля — начале марта. Пикировку сеянцев делают в фазе 1-2 настоящих листьев. Рассаду перца рекомендуется выращивать в течение 60 дней от всходов и высаживать в фазе бутонизации.

В теплицу рассаду высаживают в середине мая, а в открытый грунт – в начале июня, после того, как минует угроза возвратных заморозков. Схема посадки 40 х 60 см.

В теплице сорт выращивают на шпалере с формированием в 2 стебля.

Растениям перца необходимы регулярные поливы, прополки, рыхления и подкормки.
к содержанию ↑

Сладкий перец Клякса, видео

Отзывы о перце Клякса

Если вы выращивали сладкий перец Клякса, напишите, пожалуйста, понравился он вам или нет. Какая урожайность и вкус плодов были в ваших климатических условиях? Напишите вкратце достоинства и недостатки этого сорта на ваш взгляд. По возможности прикрепите к комментарию фото ваших перчиков. Спасибо!

Ваши отзывы о перце Клякса и дополнения к описанию помогут многим садоводам оценить этот перец объективно и решить — стоит его сажать или нет.

Что делать, если струйный принтер мажет бумагу при печати?

Появление чернильных клякс на отпечатках – распространенная проблема, с которой часто сталкиваются владельцы струйных печатающих устройств. Сначала проверьте впитывающую подкладку, которая размещена внутри принтера по ходу движения каретки. Она может оставлять следы от чернил — чтобы этого не происходило ее нужно просто протереть сухой салфеткой. Кроме того, могут быть загрязнены ролики протяжки, которые тоже следует протереть сухой салфеткой, чтобы последняя впитала чернила и вы продолжили распечатывать документы в хорошем качестве. 

Если это не помогло, то:

• вставьте в принтер лист, предварительно смочив его нижний край моющим средством;

• запустите печать, при этом верхний край придерживайте рукой, пока не появится системное сообщение об отсутствии бумаги;

• повторите процедуру несколько раз до полной очистки роликов.

Правда, это не полный перечень того, что стоит проверить, когда ПУ начинает оставлять чернильные кляксы, либо продольные или поперечные полосы на бумаге.

Причины возникновения клякс

Если струйный принтер мажет бумагу, это может быть вызвано несколькими причинами:

1. Неправильно подобран носитель. Например, вы купили фотобумагу плохого качества, вследствие чего она деформируется и печатающая головка мажет ее. Также чернильные капли могут появляться и на офисной бумаге, что обычно связано с ошибочно выбранными настройками печати для глянцевой или матовой фотобумаги. Толщина листа тоже имеет значение — если она больше, чем нужно, то бумага просто не может впитать чернила, которые на нее попадают, потому возникают кляксы.

2. Используются неровные листы. Даже незначительное замятие бумаги приводит к тому, что во время печати на ее краях появляются кляксы. Это происходит потому, что бумага пачкается, цепляясь за печатающую головку.

3. Система непрерывной подачи чернил (СНПЧ) стоит выше печатающей головки. Избыточное давление приводит к вытеканию чернил и это отражается на распечатанных документах или снимках. Просто поставьте систему на один уровень с принтером.

4. Вышел из строя обратный клапан картриджа, назначение которого не позволяет произвольно выливаться чернилам. Если вы используете одноразовые расходники, то вам нужно вытянуть их и аккуратно постучать картриджами по салфетке, но так, чтобы чернила не вылились, иначе придется менять комплект на новый. Кроме того, не забудьте протереть головку устройства и парковочное место.

5. Нарушилась герметичность картриджа, что может произойти во время перестановки или транспортировки принтера. Это значит, что картридж нужно заменить, а парковочное место головки и резиновую щеточку, что предназначена для ее очистки, нужно промыть специальной жидкостью. 

Если вы используете качественные носители, у вас нет проблем с расходниками и СНПЧ возле принтера установлена правильно, а он все равно мажет бумагу, тогда обратитесь в сервисный центр, где вам обязательно помогут решить данную проблему. 

 

Тульские воспитатели: Читайте детям книги и оживляйте кляксы! – Фотогалерея, фото 1

На фото Елена Зеленова. Фото Максима Котенёва

Двум маленьким Артёмам, Сонечке и Арише недавно исполнилось по четыре года. Но уже сейчас они точно знают, как приготовить суп или кашу, как выглядит помидор, огурец, баклажан или перец и какими эпитетами можно описать четыре времени года. Этому их учат в детском саду.

Детки развиты не по годам! Занятия, разработанные воспитателями одного из тульских детских садов Еленой Зеленовой и Еленой Кудратовой, проводятся параллельно с уроками основной образовательной программы и направлены на всестороннее развитие ребенка.

Елена Зеленова

— Чтобы заинтересовать ребенка, не обязательно тратиться на дорогие игрушки, — говорит Елена Зеленова. — Мы сами делаем игрушки, причем получаются они не менее занимательные и полезные, чем магазинные.

Елена выложила на столик перед детьми плетеную корзинку. Надев куклу-перчатку, она начала поочередно доставать из корзинки настоящие овощи. Задача детей — правильно назвать эти овощи — стала некой подготовкой к настоящей крупной игре. После закрепления материала на столе появилось следующее: пробки от пластиковых бутылок, на которых наклеены черно-белые рисунки овощей, и рулетка.

— Я взяла обычную юлу, — рассказывает Елена, — разобрала ее и сделала на круглой плоскости несколько картонных отсеков, в каждом из которых под бумажной крышечкой лежат пластилиновые овощи. В отсеках — ингредиенты для супов. Детям нужно крутить рулетку и называть суп, на который они попали, а также овощи, из которых его варят.

После этого упражнения Елена попросила детей взять пробки и раскрасить только те овощи, которые им потребуются для супа. Родителям на заметку: те же самые действия можно проделать с кашами и злаками.

Затейливый и бюджетный вариант познавательной игры хорош для тех, у кого много свободного времени.

Надо четко понимать: работа любого, даже самого лучшего воспитателя не принесет свои плоды, если с ребенком не будет дома заниматься семья.

Поэтому Елена Кудратова пытается как можно чаще вовлекать родителей и детей в совместное творчество.

Елена Куратова

— Я обучаю детей нетрадиционной технике рисования и часто даю творческие задания, к которым подключаются мамы, папы и даже бабушки с дедушками, — рассказывает Елена. — Что это за техника? Мы рисуем пальчиками, ладошками, листочками деревьев и даже ватными палочками. Это огромный толчок к развитию воображения, проявлению самостоятельности и выражению индивидуальности. Занятия нетрадиционным рисованием способствуют развитию зрительно-моторной координации, фантазии, логики и мышления, что очень важно для подготовки дошкольника к обучению в школе.

С Еленой дети занимаются и кляксографией. Это такая специальная техника: ребенок делает на листе отпечаток пальца или ладошки, а после дорисовывает картинку до существующих образов.

До изображения ежика, например, или совы. Работы детей, кстати, занимают призовые места на международных конкурсах.

Занятия Елены Зеленовой и Елены Кудратовой дают приличные результаты. По крайней мере, так говорят родители малышей.

Оксана Костикова

Мой ребенок научился общаться не только со своими сверстниками, но и со взрослыми. Теперь ему есть чем поделиться с людьми: мы знаем полезные ископаемые, названия растений, животных, городов, стран. Дома мы мало об этом говорим, а вот в дет­ском садике ребенка как раз этому учат.

Любовь Помазан

Мы перешли в эту группу из другой. Моя Даша раньше ходила в сад буквально со слезами. Мы даже подумывали о том, чтобы вовсе отказаться от садика. Но потом появилось место в другой группе, мы перешли в нее, и теперь дочка просыпается со словами: «Мама, пошли в садик». Я заметила, что она стала более открытой. И если раньше дома она только играла в куклы, то теперь просит повырезать вместе из бумаги, полепить из пластилина или просто порисовать.

Ольга Гузмина

У меня есть старший сын. В свое время в его группе в детском саду не было таких чудесных воспитателей. Мы занимались по обычной программе, ребенок практически не развивался творчески. Теперь у нас есть некоторые трудности с учебой в школе. Думаю, у младшего ребенка этого не будет, поскольку в садике воспитатели помогают развить мелкую моторику, образное мышление и речь.

Родителям на заметку

Советы тульским родителям дает героиня нашей сегодняшней публикации воспитатель Елена Зеленова.

Как развить речь?

— В первую очередь нужно работать над мелкой моторикой. Учеными давно доказано, что мысль человека движется с той же скоростью, что и рука. Если ребенок не шнурует ботинки, не застегивает пуговицы, мало рисует, лепит, играет, то, вероятнее всего, он будет отставать в развитии речи. Мелкую моторику нужно тренировать вплоть до пятого класса. Но если маленьким детям дают крупу, горох и фасоль, то после шести лет можно давать и бисер. Для развития речи нужно также заниматься с ребенком дыхательной и артикуляционной гимнастикой.

Как обучить ребенка вежливости?

— Самый главный пример для детей — это мы, родители. Если, выходя из дома, мы здороваемся с каждым соседом, ребенок это запоминает и перенимает. Если же родитель или другой авторитетный для ребенка человек ведет себя некорректно и грубо, то ребенок берет и эту модель поведения. Так что, заботясь о том, чтобы ребенок был вежливым, помните: дети — это губка, а мы — вода, которую эта губка впитывает.

Интернет и гаджеты: зло или благо?

— Я считаю, компьютерные игры детям не нужны, и вплоть до пятого класса лучше не приучать к ним. В нашем обществе большая проблема: родители вечно заняты, и чтобы хоть как-то занять ребенка, дают ему телефон или планшет. Малыш в него полностью погружается и перестает реагировать на окружающую действительность.

И когда ребенок идет в школу, родители сталкиваются с проблемой: малыш не может четко высказать свои мысли.

Лучше позаниматься с детьми, поговорить с ними. К примеру, спрашивать: «Какая сейчас погода?», «Кто живет в лесу?», «Чем питаются птички?». Это очень занимает детей и идет им на пользу.

Как уговорить малоежку покушать?

— Для детей все происходящее — игра. Ту же самую кашу можно преподнести так, будто она волшебная. Вы знаете своего ребенка как никто другой, поэтому легко сможете определить его желания. «Ты хочешь быть такой красивой, как принцесса. Но о какой же красоте может идти речь, если ты не кушаешь чудодейственную кашу?», «Все супергерои на завтрак, обед и ужин ели этот суп! Ты же хочешь быть похожим на них?» — подобные игры быстро действуют на детей.

Как справиться с гиперактивным малышом?

— Гиперактивные дети могут держать в узде всю группу. Нужно просто направить их энергию в нужное русло: у нас в садике, к примеру, для этого создана театральная студия. Там малыши выкладываются по полной, и у них просто не остается сил на баловство. Дома родители могут разыгрывать с детьми сценки, примеряя на себя те или иные роли. Детишки обожают мультипликационных героев и с радостью сыграют в любую игру, где упоминаются эти персонажи.

Picture

Шаблон Picture содержит поток недавно опубликованных изображений на своей индексной странице.

Назначение шаблона «Картинка» — отображать фотографии. Его навигация не должна мешать вам при просмотре фотографий. Он должен предлагать возможность просматривать фотографии разных размеров. На главной странице отображается лента недавно опубликованных фотографий. В архивах представлен обзор всех фотографий, опубликованных на этом сайте.

Веб-сайт штата Джорджия Кареола является источником макета для этого шаблона.Мне нравится сетка меню и, в частности, типографика подстраниц.

Компиляция пользовательских интерфейсов изображений Гэвином Аткинсоном была полезным источником интересных методов навигации и индексации изображений.

Страница архивов Хофстеде имеет действительно приятный эффект наведения, при этом эскиз для зависшей ссылки отображается слева.

Хорошая работа сотрудников Are.na и Cargo Collective — постоянный источник мотивации.

Я старался вести себя как можно тише.При разработке темы легко потеряться в украшении темы chrome , ее строке меню и поле поиска. Я постарался сосредоточиться на деталях. Вот несколько вещей, которые я сделал с этим шаблоном, которые могут не бросаться в глаза:

• Миниатюры никогда не обрезаются. Они всегда отображаются в формате, выбранном фотографом. Поступать иначе кажется грубым. Конечно, это усложняет верстку, но это моя работа. Я считаю, что макеты, в которых не соблюдается соотношение сторон, выбранное фотографом, ленивы.

• При разбивке на страницы на странице индекса используются табличные числа вашего системного шрифта, где это возможно. Это предотвращает изменение ширины индикатора страницы.

• Годы в нижнем колонтитуле указывают на диапазон опубликованных работ. Иногда это выглядит немного глупо, если вы опубликовали только в этом году, но просто наберитесь терпения!

• Когда нет разбивки на страницы, мы вместо этого перечисляем количество записей, отображаемых на странице, чтобы сохранить баланс макета навигации.

• Этот шаблон просто скрывает все функции поиска Blot, поскольку он не так полезен для фотографий.

• Вычисленные ширина и высота эскиза используются для блокировки макета страницы индекса перед загрузкой изображений. Это означает, что ничего не нужно пересчитывать по мере того, как каждое изображение проходит по трубам. Это предотвращает «смещение» макета, что, как мне кажется, заставляет веб-сайты чувствовать себя неубедительно.

• Функция постепенного изменения изображения при загрузке для сетки изображений использует крошечный объем JavaScript и класс CSS.

Просмотрите исходный код для шаблона изображения.

Бьорн Аллард (1923–2006) работал фотографом в Управлении национального наследия Швеции в 1950-х и 1960-х годах. Он принимал участие в археологических исследованиях и раскопках, чтобы делать документальные фотографии.

Улучшенное обнаружение вестерн-блоттинга с использованием цифрового изображения ПЗС | Thermo Fisher Scientific

Производство имидж-сканера myECL прекращено.На этой странице представлены справочные материалы для существующих владельцев тепловизора myECL.

Хемилюминесцентный вестерн-блоттинг — популярный метод обнаружения белков для изучения белков. Типичный протокол для измерения хемилюминесцентного сигнала подвергает вестерн-блоттингу рентгеновской пленке лабораторного качества, но цифровая визуализация с использованием охлаждаемой CCD-камеры оказывается более функциональным выбором для исследователей.Thermo Scientific myECL Imager предлагает цифровую визуализацию с рядом улучшений по сравнению с пленочным обнаружением, включая большую чувствительность сигнала, линейность и динамический диапазон.

Исследователь Никки Джарретт с тепловизором MyECL Thermo Scientific.

Вестерн-блот-анализ использовался для качественной оценки присутствия конкретного представляющего интерес белка в образце с целевым антителом.Относительные различия в количествах белка можно оценить по интенсивности сигнала, поскольку она обычно коррелирует с количеством белка в блоте. Сканирование пленки с помощью базового сканера документов и использование программного обеспечения для анализа изображений использовалось для извлечения некоторой количественной информации; однако денситометрия по сканированному изображению рентгеновской пленки может быть сложной задачей (ссылка 1), а хемилюминесцентный вестерн-блоттинг обычно не считается количественным.

Альтернативой рентгеновской пленке для захвата люминесцентных сигналов от вестерн-блотов является использование охлаждаемой CCD-камеры.В камерах с зарядовой связью (CCD) используется светочувствительный кремниевый чип, который преобразует фотоны в цифровые сигналы. Формирователи изображений с камерами CCD раннего поколения, предназначенные для работы в условиях низкой освещенности, не могли сравниться по скорости или чувствительности с рентгеновской пленкой.

Недавние усовершенствования в технологии CCD позволили разработать и выпустить на рынок чувствительные камеры CCD с охлаждением, улавливающие свет больше, чем у пленки. Высокопроизводительные камеры CCD охлаждают кремниевый чип до минусовых температур, чтобы уменьшить темновой ток, который создает фоновый шум.Для дальнейшего повышения чувствительности обнаружения пиксели или светозахватывающие блоки ПЗС-чипа можно комбинировать или группировать. Биннинг увеличивает размер каждого пикселя, что эффективно увеличивает количество света, собираемого в области пикселя.

Рисунок 1.Как биннинг может улучшить чувствительность.

Комбинируя высокочувствительную камеру CCD и программное обеспечение для анализа цифровых изображений, исследователи, выполняющие хемилюминесцентный вестерн-блоттинг, могут иметь возможность извлекать более точную качественную и количественную информацию, чем ранее было доступно с пленкой. В этой статье мы демонстрируем, что myECL Imager превосходит рентгеновскую пленку по чувствительности, динамическому диапазону и линейности сигнала.

Для сравнения изображений на ПЗС-камере и рентгеновской пленке мы исследовали сигналы, генерируемые эталонной микропланшетой люминометра, отслеживаемой NIST (Harta Instruments, # RM-168), и нашими собственными хемилюминесцентными вестерн-блотами, содержащими серийно разведенные образцы, охватывающие диапазон обнаружения для формирователей изображений. и фильм. Мы регистрировали сигналы в цифровом виде с помощью myECL Imager и путем экспонирования на рентгеновскую пленку.(Проявленные пленки затем сканировали с высоким разрешением для получения оцифрованных версий для анализа.) Наконец, мы проанализировали изображения с помощью программного обеспечения MyImageAnalysis от Thermo Scientific.

Более высокая чувствительность и динамический диапазон по сравнению с рентгеновской пленкой

Изображения, полученные с помощью тепловизора myECL, более чувствительны, чем пленка. Семь из восьми пятен на эталонной пластине видны и различимы над фоном при 300-секундной экспозиции, полученной с помощью myECL Imager (рис. 2).Напротив, только пять из восьми пятен видны при 300-секундной выдержке пленки. Денситометрия этих изображений показывает 1000-кратный динамический диапазон (максимальная интенсивность сигнала / минимальная интенсивность сигнала) в myECL Imager по сравнению с 1,5-кратным динамическим диапазоном для пленки, где динамический диапазон рассчитывается из плотности пятна 1, деленной на плотность пятна 8 (рисунок 2; таблица 1). Качественная оценка примеров вестерн-блоттинга показывает, что myECL Imager обнаруживает дополнительную полосу серии разведений лизата HeLa по сравнению с пленкой (рис. 3).

Рис. 2. Сравнение чувствительности изображения и динамического диапазона пленки и тепловизора Thermo Scientific myECL. Панель A. При стандартном биннинге (3 × 3) изображения эталонного микропланшета люминометра на тепловизоре myECL показывают большую чувствительность, чем изображения с пленки.Панель B. Анализ изображений эталонной пластины люминометра демонстрирует больший динамический диапазон сигнала при использовании myECL Imager по сравнению с пленкой.

Таблица 1. Денситометрические значения для 300-секундной экспозиции эталонной пластины. Результаты показывают 1000-кратный (45017/45) динамический диапазон для myECL Imager и 1,5-кратный (62734/41286) динамический диапазон для рентгеновской пленки.

Эталонный микропланшет люминометра		Плотность (интенсивность / площадь)
Место #	Relative Light Units	тепловизор myECL	Рентгеновская пленка
1	2325926	45017	62734
2	1378005	44960	62517
3	279943	36210	61699
4	28595	18483	52635
5	7239	4684	45643
6	1478	919	42289
7	169	125	41545
8	17	45	41286

Рисунок 3.Сравнение чувствительности ПЗС-изображения и рентгеновской пленки. Показаны изображения вестерн-блоттинга 2-кратно серийно разведенного лизата HeLa, зондированного анти-PLK1 (панель A) и антициклофилином B (панель B). Блоты инкубировали с субстратом SuperSignal West Dura Substrate и экспонировали в течение 10 секунд на пленку и myECL Imager (биннинг 3 × 3).

Линейность сигнала

Линейность сигнала — важный фактор для количественного измерения.Когда зависимость между интенсивностью сигнала и количеством образцов является линейной, неизвестные количества образцов могут быть рассчитаны с использованием простой модели линейной регрессии. Визуально результаты вестерн-блоттинга на рентгеновской пленке могут показывать широкий диапазон линейности сигнала; однако денситометрия показывает, что сигналы на пленке имеют узкий линейный динамический диапазон. Имеются различия в линейности сигнала между устройством формирования изображения myECL и рентгеновской пленкой (рис. 4). Изображения, полученные с помощью myECL Imager, показывают линейное увеличение сигнала для GFP-HA до 1 нг, тогда как линейное увеличение сигнала на изображениях на пленке составляет до 0.125нг. Насыщение сигнала было достигнуто на пленке при 0,125 нг GFP-HA по сравнению с 2 нг на тепловизоре myECL.

Рисунок 4.Линейность сигнала ограничена рентгеновской пленкой по сравнению с тепловизором. Вестерн-блоттинг против HA, обнаруживающий 2-кратные серийные разведения GFP-HA (2-0,004 нг) и отображаемый в виде 5-секундной экспозиции с помощью myECL Imager с биннингом 3 × 3 (панель A) и пленкой (панель B). Насыщение сигнала было достигнуто с образцом 2 нг с использованием myECL Imager (панель C) и 0,125 нг с использованием пленки (панель D).

Высокое объединение пикселей в тепловизоре myECL увеличивает чувствительность изображения

Объединение пикселей — это способность объединять сигналы от соседних пикселей для увеличения способности захвата света (чувствительности) ПЗС-кристалла.И наоборот, комбинация пикселей приведет к увеличению пикселя, что затем приведет к более низкому разрешению захваченного изображения.

Каждое увеличение биннинга приводит к увеличению светозахватывающей способности или чувствительности (Рисунок 5). Регулировка настройки биннинга позволяет исследователю найти желаемый баланс между чувствительностью, разрешением и временем экспозиции. Мы обнаружили, что настройка по умолчанию 3 × 3 обычно обеспечивает наилучшее сочетание чувствительности и разрешения при использовании myECL Imager.

Рис. 5. Результат биннинга по чувствительности изображения. Эталонный микропланшет люминометра отображали на myECL Imager в течение 30 секунд при каждой из пяти настроек биннинга и на пленке. Большее количество пикселей приводит к большей чувствительности с соответствующим увеличением размера пикселя.Изображения myECL и пленки были настроены на оптимальный контраст для отображения.

Исследователи наук о жизни традиционно использовали рентгеновскую пленку для вестерн-блоттинга. Это обеспечивает качественные данные для обнаружения белка, но пленка ограничивает количественное определение белка из-за узкого динамического диапазона и низкой чувствительности. Дополнительные недостатки пленки, такие как устранение опасных проявлений, техническое обслуживание пленочных процессоров и необходимость в темной комнате, делают создание цифровых изображений более простым и практичным.MyECL Imager с широким линейным динамическим диапазоном позволяет исследователям извлекать количественные данные из вестерн-блоттинга с дополнительными преимуществами удобства и чувствительности.

Контрольная пластина люминометра, временная шкала

Эталонный микропланшет люминометра (Harta Instruments, # RM-168) использовался для демонстрации скорости визуализации и чувствительности тепловизора myECL по сравнению со стандартной рентгеновской пленкой (Thermo Scientific CL-XPosure Film, Part No.34090). Контрольная пластина содержит восемь источников света (пятен) различной известной интенсивности сигнала и обычно используется для калибровки люминометра. Изображения были захвачены на пленку и на имидж-сканер myECL с использованием всех пяти настроек биннинга (1 × 1, 2 × 2, 3 × 3, 4 × 4 и 8 × 8) при временах выдержки 10, 30, 60, 120 и 300. секунд. Пленка была проявлена ​​в пленочном процессоре Konica Minolta ™ SRX-101A с реагентами проявителя. Чтобы создать цифровые изображения пленки для анализа, каждая пленка сканировалась с помощью фотосканера Epson ™ 4990 как 16-битное изображение TIFF в оттенках серого 300 PPI (пикселей / дюйм), чтобы оно соответствовало выходному изображению myECL Imager.Анализ изображений выполнялся с использованием программного обеспечения Thermo Scientific myImageAnalysis. Для анализа вручную область равного размера помещали поверх каждого из восьми световых пятен эталонной пластины, и плотность (интенсивность пикселей / площадь области) наносили на график в зависимости от наблюдаемого RLU (относительные световые единицы) на основе сертификата анализа производителя. Для публикации был отрегулирован контраст уровня белого на изображениях, полученных с помощью myECL Imager, для отображения пикселей с низкой интенсивностью.

Вестерн-блоттинг

Пятьдесят микрограммов лизата HeLa серийно разводили (в 2 раза на каждой дорожке) в 4-кратном буфере для образцов LDS (продукт № 84788) с добавлением DTT до конечной концентрации 50 мМ.Количество образца, нанесенного на гель, составляло 50, 25, 12,5, 6,25, 3,13, 1,56, 0,781, 0,391, 0,195 и 0,0977 мкг лизата. Образцы загружали в 4-20% трис-глициновые гели Thermo Scientific Precise (деталь № 25249) и переносили на мембрану для переноса PVDF Thermo Scientific (деталь № 88518), используя быстрый блоттер Thermo Scientific Pierce G2 (деталь № 62288) и Одноступенчатый буфер переноса (номер по каталогу 84731). Блоты исследовали с помощью мышиных анти-PLK1 (Ab № MA1-848) или кроличьих антициклофилина B (Ab № PA1-027A) в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к Thermo Scientific Fast Western, SuperSignal West Dura Kit (Part No.35070) на 1 час. Реагенты против быстрой вестерн-оптимизированной пероксидазы хрена (HRP) против мыши или кролика добавляли на 10 минут с последующими четырьмя 5-минутными промывками Thermo Scientific Fast Western Wash Buffer. Субстрат SuperSignal West Dura был добавлен на 5 минут перед отображением на пленке с последующим захватом изображения с помощью myECL Imager. Потеря сигнала между событиями визуализации (приблизительно 5 минут) была незначительной (данные не показаны). Изображения были получены на myECL Imager в режиме Chemi с настройкой биннинга по умолчанию (3 × 3).Рентгеновская пленка проявлялась и сканировалась, как описано выше.

In vitro Экспрессия белка

Для экспрессии зеленого флуоресцентного белка (GFP) с C-концевой меткой HA использовали набор для экспрессии белка In vitro In vitro Thermo Scientific для человека (деталь № 88882). Сайты рестрикции Xho I и Nde I были добавлены к 5 ’и 3’ концам, соответственно, в открытую рамку считывания GFP из Pontellina plumata . Этот фрагмент был вставлен в сайт множественного клонирования вектора экспрессии pT7CFE-CHA, который содержит вышестоящие элементы транскрипции и экспрессии, необходимые для трансляции in vitro и C-концевой тег HA (гемагглютинин гриппа человека-YPYDVPDYA).Экспрессию белка проводили, как описано в протоколе набора. После экспрессии белка концентрацию GFP определяли путем измерения флуоресценции (482ex / 502em) в Safire ™ Microplate Reader и сравнивали со стандартом GFP.

Линейность сигнала

Последовательное разведение от 2,0 до 0,004 нг , экспрессируемого in vitro GFP, загружали в 4-20% гели Precise Tris-Glycine и переносили на нитроцеллюлозную мембрану с использованием быстрого блоттера Pierce G2 и буфера для одноэтапного переноса.Блот исследовали мышиным анти-НА антителом Thermo Scientific (деталь № 26183) в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к набору Fast Western, SuperSignal West Dura Blot Kit в течение 1 часа. Добавляли реагент против мышиной Fast Western, оптимизированный для HRP, на 10 минут с последующими четырьмя 5-минутными промывками Fast Western Wash Buffer. Субстрат SuperSignal West Dura Substrate был добавлен на 5 минут перед отображением на пленке, а затем myECL Imager. Потеря сигнала между событиями визуализации (приблизительно 5 минут) была незначительной (данные не показаны).Для анализа вручную использовалась область равного размера для каждой из полос GFP-HA на всех 10 дорожках плюс репрезентативная фоновая область. Плотность за вычетом глобального фона (интенсивность пикселей / площадь области) наносили на график против нанограмм GFP-HA. Для публикации был отрегулирован контраст уровня белого на изображениях, полученных с помощью myECL Imager, для отображения пикселей с низкой интенсивностью.

1. Гассманн, М., Граначер Б., Роде Б. и Фогель Дж. (2009) Количественная оценка вестерн-блоттинга: подводные камни денситометрии. Электрофорез 30: 1845-55.

Эта статья была впервые напечатана как Application Note 1602635, April 2013.

Как вы визуализируете свои вестерн-блоты?

Последний шаг в вестерн-блоттинге — визуализация блоттинга — это момент истины, когда вы наконец увидите результаты эксперимента, над которым так долго работали! Есть множество различных способов изобразить вашу кляксу.Выбранный вами метод будет во многом зависеть от типа оборудования, имеющегося в вашей лаборатории, а также от реагентов, которые вы используете для обнаружения сигналов белков. Читайте дальше, чтобы узнать больше о различных методах визуализации…

Рентгеновская пленка

Проявление блоттинга на рентгеновской пленке — традиционный способ обнаружения белковых сигналов. Рентгеновская пленка будет действовать так же, как фотопленка, которая «обесцвечивается» под воздействием света. Когда вы делаете снимок, изображение отпечатывается на пленке из-за разного количества окружающего света, который достигает поверхности пленки, поэтому фотографии, сделанные в яркий солнечный день, выглядят размытыми, а фотографии, сделанные в темноте, почти черными.В случае разработки блота, свет исходит от химической реакции между пероксидазой хрена (HRP), которая конъюгирована с вашим вторичным антителом, и раствором ECL, который вы используете для обнаружения сигнала. Вы должны быть абсолютно уверены, что обращаетесь с пленкой в ​​закрытой темной комнате, чтобы не подвергать пленку яркому окружающему свету (для новых исследователей это обряд посвящения — подвергать всю коробку с дорогой пленкой свету из-за плохого обращения — стыд, который вы испытываете, не позволит вам когда-либо повторить это снова!).

Чтобы проявить свой блот, просто погрузите его поверхность в проявляющий раствор на 1-2 минуты. Затем заверните его в полиэтиленовую пленку, чтобы с нее не капала вода, и бегите в комнату для проявки. В комнате для проявки должен быть красный свет, который можно использовать при работе с пленкой. Поместите блот лицевой стороной вниз на кусок пленки и закройте кассету для проявления — это прижмет блот к пленке и устранит любой другой возможный источник света, убедившись, что вы получаете четкий и сильный сигнал.У каждой комбинации белок-антитело разное оптимальное время воздействия, но обычно пленку нужно экспонировать в течение 1–10 минут. Осторожно открывайте кассету, чтобы не сдвинуть пятно и пленку друг относительно друга (что приведет к появлению размытых полос). Затем вы можете вставить пленку прямо в проявитель — или, если ваша лаборатория действительно старая школа, вы можете проявить пленку вручную, используя последовательные ванны с проявочными растворами. Я видел их повсюду, но никогда не видел, чтобы кто-нибудь ими пользовался!

Проявление рентгеновской пленки может быть медленным и немного беспорядочным, но это дает вам полный контроль над процессом проявления, включая время экспонирования и даже возможность подвергать свою пятно одной и той же части пленки несколько раз.

ПЗС-камера

Использование сканера CCD — это более современный способ визуализации вестерн-блоттинга. Эти формирователи изображения содержат детектор, который преобразует химический сигнал (возникающий в результате реакции HRP-ECL, описанной выше) в цифровое изображение. Эти машины очень похожи на имидж-сканер, который вы использовали бы для визуализации геля ДНК — и на самом деле многие тепловизоры могут обрабатывать оба типа обнаружения. Чтобы подготовить свой блот для создания изображения на ПЗС-матрице, вы следуете в основном той же процедуре, что и при подготовке к рентгеновской пленке.Единственное отличие состоит в том, что после того, как вы извлекли мембрану из проявочного раствора, вы можете поместить ее прямо на столик визуализации ПЗС-сканера. Затем тепловизор автоматизирует процесс проявления пятна: просто нажмите кнопку «изображение», и он сделает несколько разных экспозиций пятна и сохранит все изображения, чтобы вы могли сравнить их и выбрать понравившееся.

ПЗС-устройства формирования изображений

намного удобнее, чем использование рентгеновской пленки, и они позволяют обойти проблему обращения с пленкой и необходимости использовать специальную темную комнату для проявки.Также приятно иметь ваше изображение уже в цифровой форме, вместо того, чтобы сканировать в физическом блоте после того, как вы его проявили. Однако эти тепловизоры довольно дороги — многие отделы покупают по одному для всех своих исследователей. Кроме того, для некоторых формирователей изображения требуются специальные проявляющие реагенты, как описано ниже.

Что нужно учитывать

Независимо от того, используете ли вы рентгеновскую пленку или ПЗС-датчик изображения для изображения своих пятен, необходимо учитывать несколько параметров.Вероятно, наиболее важная проблема — это чувствительность используемого вами метода: насколько яркий ваш сигнал и насколько сложно его обнаружить? Сила сигнала будет зависеть от множества переменных, в том числе от того, сколько у вас белка и какие концентрации первичных и вторичных антител вы использовали. Если вы используете пленку, то поверхность пятна прижимается вплотную к пленке, поэтому любой исходящий сигнал будет обнаружен. Однако, если вы используете формирователь изображения, свет должен пройти от предметного столика к детектору, который часто находится на расстоянии 12 дюймов или более.Это означает, что сигнал сопоставимой мощности необходимо будет экспонировать в течение более длительного времени, чтобы получить тот же конечный результат (или изображение). По этой причине компании, производящие ПЗС-устройства формирования изображений, часто рекомендуют специальные решения для разработки, которые будут генерировать более яркий сигнал.

Для подробного сравнения этих двух различных методов визуализации взгляните на эту предыдущую статью.

Для получения дополнительной информации о вестерн-блоттинге посмотрите это видео от Agrisera.

Вам это помогло? Тогда поделитесь, пожалуйста, со своей сетью.

StarrLab — презентации вестерн-блоттинга

Представляя вестерн-блот на совещании или презентации лаборатории Старра, включите следующую информацию:

Название: Дата, белок (белки) и клеточные лизаты, включая анализируемые условия.

Подзаголовок: Ваши инициалы и дата, подробные сведения о которых можно найти в лабораторной книге (см. Сведения о лабораторной книге).

Исходные изображения блотов

• Эскизы полных изображений блотов
• Имена файлов исходных изображений на машине proteinimple

Изображение блота, используемое для денситометрических измерений

• Обозначьте каждую полосу (необязательно: используйте числа и укажите номер ниже)
• Обозначьте размеры полосок
• Обозначьте интересующие полосы с названием белка
• Обозначьте контрольную полосу с наименованием белка

График денситометрии

• Название: Описание эксперимента
• Этикетка по оси X: Клетки
• Метка по оси Y: Экспрессия белка относительно контрольного лизата , нормализованная к гену домашнего хозяйства .(замените слова красным цветом на ваш конкретный эксперимент)

Подпись и выводы

• Подпись к рисунку: короткий абзац, описывающий метод вестерн-блоттинга.
• Рисунок вывод: Короткий абзац с вашими выводами.

Передача изображений в PowerPoint с помощью FIJI (ImageJ)

• Откройте изображение пятна и изображение лестницы и преобразуйте оба изображения в 8-битные (Изображение> Тип> 8-бит)
• Обычно инвертируйте изображение пятна, чтобы полосы были черный, а фон белый (Правка> Инвертировать)
• Отрегулируйте как изображение пятна, так и изображение лестницы (Изображение> Настроить> Яркость / Контраст), чтобы они выглядели хорошо для вас
• Поверните изображения так, чтобы полосы были на горизонтальной линии (Изображение> Трансформировать> Повернуть), затем отрегулируйте Угол, пока полосы не станут горизонтальными.Используйте линии сетки = 20, билинейную интерполяцию и щелкните поле предварительного просмотра. Убедитесь, что оба изображения повернуты одинаково.
• Очистите все за пределами лестницы на изображении лестницы, нарисовав прямоугольник вокруг дорожки лестницы, затем используйте Правка> Очистить снаружи
• Использование снимка экрана (shift-ctrl-command-4), сделайте снимок изображения лестницы и изображения пятна и вставьте их в PowerPoint.
• Чтобы разместить лестницу, вернитесь в FIJI и щелкните изображение пятна, затем наложите лестницу (Изображение> Наложение> Добавить изображение).Выберите изображение лестницы и установите непрозрачность ~ 75%. Это создаст изображение, которое позволит вам выровнять положение лестницы рядом с изображением блота в PowerPoint.

Ниже приведен пример хорошо представленного вестерн-блоттинга

ФОТО СЕН-РЕМИ-ДЕ-БЛО: Фотографии, фотографии Сен-Реми-де-Блот 63440

Город на старых фотографиях Сен-Реми-де-Бло
Эти фотографии, сделанные недалеко от города Сен-Реми-де-Бло, можно просматривать в полноэкранном режиме, щелкая по эскизам.Фотографии являются собственностью их владельцев.
		Вид из Шато Роше Снимок сделан 22 августа 2013 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Пон-де-Менат, пересекая Ла-Сиуль. Франция. Снимок сделан 8 июня 2013 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		63 Saint-Rémy-de-Blot — Châteaurocher Дата: 17 августа 2011 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Canotage au Pont de Menat Снимок сделан 20 сентября 2012 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Château-Rocher Снимок сделан 11 июля 2012 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Блот Роше Дата: 07 июня 2010 г. Автор: Изображение города Сен-Реми-де-Бло
		lisseuil Фотография сделана 2 мая 2008 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Château Rocher Снимок сделан 13 сентября 2010 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		63 Сен-Реми-де-Бло — Руины Шато Роше Дата: 29 марта 2014 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Ruine dans les combrailles Снимок сделан 15 августа 2012 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Сен-Реми-де-Бло Снимок сделан 26 апреля 2009 г. Снято: Снимок города Сен-Реми-де-Бло		Wandelroute langs Sioule Дата: 18 августа 2009 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Vue Снимок сделан 22 сентября 2010 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		La Sioule Снимок сделан 7 ноября 2013 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Moulin des Garachons Дата: 25 октября 2013 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Шато-Роше Снимок сделан 22 февраля 2014 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Point de vue de la sioule depuis navoirat Снимок сделан 29 апреля 2014 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Источник miraculeuse, Lisseuil Дата: 25 октября 2013 г. Автор: Изображение города Сен-Реми-де-Бло
		Ла Сиуль (Пюи-де-Дом) Фотография сделана 3 февраля 2008 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Le Pont de Menat Снимок сделан 20 сентября 2012 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		La Sioule Дата: 07 июня 2010 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Шато-Роше Снимок сделан 22 июля 2012 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Pont Roman de Menate sur la Sioule Снимок сделан 7 июня 2010 г. Снято: Снимок города Сен-Реми-де-Бло		Pecher à la Mouche… Дата: 07.06.2010 Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Шато-Роше Снимок сделан 24 июля 2013 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		63 Сен-Реми-де-Бло — Руины Шато Роше Снимок сделан 29 марта 2014 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Шато Роше Дата: 27 мая 2008 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Chomeil Фотография сделана 25 января 2011 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Le Chateau Rocher Снимок сделан 20 августа 2011 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Pont de Menat Дата: 20 августа 2011 г. Автор: Изображение города Сен-Реми-де-Бло
		Château Rocher Снимок сделан 15 сентября 2013 г. Фотограф: Снимок города Сен-Реми-де-Бло		Chateau Rocher vanaf Sioule Снимок сделан 18 августа 2009 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Bord de la Sioule Дата: 21 октября 2008 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Шато Роше (Шато Форт де Блот-ле-Роше) Менат / Пон-де-Менат Овернь Франция Фотография сделана 1 февраля 2011 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Шато Роше (Шато фор де Блот-ле-Роше) Менат / Пон-де-Менат Овернь Франция Фотография сделана 1 февраля 2011 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Шато Роше Дата: 14 августа 2011 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Шато Роше (Шато Форт де Блот-ле-Роше) Менат / Пон-де-Менат Овернь Франция Фотография сделана 1 февраля 2011 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Pont roman et Château-Rocher Снимок сделан 21 августа 2012 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Pont roman du Pont de Menat Дата: 21 августа 2012 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Le Pont de Menat — La Sioule Снимок сделан 4 февраля 2012 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Chateau-Rocher Снимок сделан 07 июля 2012 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		pont de Menat Дата: 2 марта 2013 г. Автор: Изображение города Сен-Реми-де-Бло
		Menat.Sioule Loisirs Фотография сделана 9 августа 2013 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Навоират Снимок сделан 29 апреля 2014 г. Снято: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Moulin des Garachons Дата: 25 октября 2013 г. Автор: Фотография города Сен-Реми-де-Бло		Eglise romane, Lisseuil Снимок сделан 25 октября 2013 г. Фотограф: Фотография города Сен-Реми-де-Бло
		Camping de Menat, le long de la Sioule Снимок сделан 9 августа 2013 г. Снято: Снимок города Сен-Реми-де-Бло

HEADT Center — Как обнаружить манипуляции с изображениями? Часть 3

Управление честности исследований США (ORI) в США уже более двух десятилетий занимается вопросами, связанными с целостностью исследований.Офис был основан в 1992 году путем объединения «Офиса научной добросовестности» и «Офиса обзора научной добросовестности». Сегодня Управление добросовестности научных исследований курирует многие виды деятельности «Службы общественного здравоохранения» по обеспечению честности исследований от имени секретаря здравоохранения и социальных служб ».

Для получения дополнительной информации об истории и повестке дня ORI посетите: https://ori.hhs.gov/

Среди множества его целей — разработка «политик, процедур и правил, связанных с обнаружением, расследованием и предотвращением неправомерных действий в исследованиях и ответственным проведением исследований.«С годами офис разработал широкий спектр мероприятий и услуг, таких как интерактивные видеоролики, тематические исследования, веб-модули и многие другие формы информирования и инструменты.

Одним из ресурсов, который офис предоставляет широкой академической аудитории, являются так называемые «инструменты криминалистики» для анализа изображений и обнаружения манипуляций, которые предоставляют настраиваемые стандартные операции и записи стандартных процедур в Adobe Photoshop.

Криминалистические капли и действия

ORI начал с разработки таких инструментов для Photoshop CS2-CS3, что привело к тому, что многие из этих подпрограмм не могут быть оценены в более поздних версиях Photoshop.Офис предлагает капли и действия: капли — это «небольшие настольные приложения (…), которые автоматически обрабатывают файлы изображений, которые перетаскиваются на их значок», тогда как действие «представляет собой последовательность шагов, которая была предварительно записана в Photoshop» и запускается изнутри. программа.

Пакет «Forensic Tools» включает в себя процедуры для улучшения определенных качеств и функций изображения, таких как капли для подсветки областей или настройки градиентов. Другие капли позволяют сравнивать два изображения или обеспечивают наложение для изображений с темным или светлым фоном.По сути, цель состоит в том, чтобы улучшить функции для поддержки видимости, чтобы скрытые детали в изображении (например, скрытая фоновая информация, артефакты или края от операций копирования-вставки) могли быть обнаружены.

Утверждается, что кроме капель, экшены для Photoshop совместимы с более поздними версиями программы. Тем не менее, офис предоставляет множество операций — слишком много, чтобы подробно рассмотреть все из них в этом сообщении в блоге — поэтому я сначала собираюсь сосредоточиться на «Расширенной карте градиента» и тем самым продемонстрировать некоторые из основных логик работы с такими действия.

В целях тестирования я составил две различные формы манипуляций с изображением обоев, чтобы продемонстрировать возможности или ограничения таких стандартных операций.

Рис. 1: Исходное изображение: Обои с декоративным растительным орнаментом. Фотография была сделана в замке Миров, Мекленбург, Западная Померания, на камеру Sony Alpha 6000 ILS.

Манипуляция 1: Подделка копированием и перемещением

Рис. 2: Изображение детали исходного изображения без манипуляций.

Рис. 3: Детали скрыты из-за клонирования фона.

Рис. 4: Копирование и перемещение цветочного элемента с помощью волшебной палочки.

Рис. 5: Полученное обработанное изображение с скопированными цветочными элементами (выделено).

Манипуляции 2: Манипуляции с вырезанием и вставкой

Вторая манипуляция менее тонкая и ее легче заметить даже невооруженным глазом.

Фиг.6: Область копирования и вставки (выделена).

Рис. 7: Деталь скопированной и вставленной области. Передняя кромка хорошо видна даже без дополнительных усовершенствований.

Анализ изображений с помощью экшена Forensic Photoshop: расширенная карта градиента

Для обработки изображения с помощью действия Advanced Gradient Map просто необходимо перетащить изображение на элемент действия. Это автоматически инициирует ряд шагов: сначала цветное изображение уменьшается до оттенков серого, затем пользователь может вручную настраивать кривые, и, наконец, действие предлагает набор цветовых таблиц, которые могут быть полезны для дальнейшего повышения контрастности.

Анализ: Манипуляции 1

Вот несколько скриншотов, которые я сделал во время выполнения действия:

Рис. 8: Регулировочные кривые.

Рис. 9: Выбор подходящей цветовой схемы для повышения контрастности

Вот как выглядит получившееся изображение:

Рис.10: Результат анализа

Результат

Действие «Расширенная карта градиента» позволяет открывать новые перспективы при анализе содержимого изображения.Тем не менее, действие не помогло выявить тонкие изменения, которые были внесены с печатью клона и волшебной палочкой — они просто остаются невидимыми. Примечание: результат мог бы выглядеть совершенно иначе с другой цветовой схемой. Нет только одного варианта.

Рис. 11: Деталь полученного изображения: нет явных доказательств манипуляции.

Анализ: Манипуляции 2

Теперь давайте посмотрим на второе измененное изображение, на котором вставленная область кажется более заметной.Опять же, анализ выполняется с применением автоматизированных шагов действия, но с другими настройками кривой и цветовой схемой. Вот как выглядит получившееся изображение:

Рис. 12: Действие Advanced Gradient Map: результат с манипуляциями вырезания и вставки

Очевидно, что в этом случае Расширенная карта градиента поддерживает идентификацию манипуляции. Края вокруг наклеенной области подчеркнуты за счет эффекта «светлой радуги» и поэтому хорошо видны.

Рис.13: Деталь действия

Advanced Gradient Map

Заключение

Как было показано в этой быстрой оценке, палитра действий ORI открывает широкий спектр возможностей, когда дело доходит до обнаружения манипуляций с изображениями — соответственно визуального исследования изображений или визуализации скрытых функций. Однако следует отметить, что ORI настроил палитру действий для анализа конкретных изображений, особенно для вестерн-блотов и других изображений из области биомедицины.Тем не менее, манипуляции, проводимые с изображениями обоев выше, в некотором роде сравнимы с манипуляциями с изображениями кляксы. Дублирование областей изображения или скрытие определенных аспектов является серьезной проблемой во многих случаях целостности биомедицинских исследований.

Помимо инструментов «судебной экспертизы», которые мы обсуждали ранее в этом блоге, экшены Photoshop поддерживают улучшение определенных функций в изображении, но не могут рассматриваться как способ автоматического обнаружения манипуляций с изображением.Напротив, применение действий требует отношения «проб и ошибок», и пользователь должен вкладывать время и усилия для получения удовлетворительных результатов. Похоже, есть манипуляции, которые нелегко отследить с помощью инструмента действия Advanced Gradient Map, но для которых требуются другие инструменты — инструменты, которые будут обсуждаться в этом блоге в ближайшее время.

Центр HEADT 2017

Вернуться к началу

Клякса (1921) — Классические фильмы Тернера

С 1970-х годов Лоис Вебер считается самой влиятельной женщиной-режиссером эпохи немого кино.Эта честь была неоднозначным благословением для ее репутации. Это свидетельствует о ее важности для индустрии, но выделение Вебера как «женщины-режиссера» затрудняет объективную оценку ее талантов.

Если смотреть объективно, без предвзятого отношения к гендерной политике, ее фильмы являются одними из самых эмоционально сильных, тщательно созданных и тематически смелых в эпоху. У Вебера кино научилось искусно, но неуклонно обращаться с запретными темами, — навыку, который по-прежнему бросает вызов большинству кинематографистов даже сегодня.Она доказала, что умные и сложные фильмы могут быть одновременно интересными и прибыльными, что побудило журнал Motion Picture Magazine считать ее «чудо-девочкой, которая произвела революцию в детском искусстве фотоспектакля».

Вебер даже сделал фильмы общественного мнения приемлемыми для крупных студий. Глава Universal Studios Карл Леммле, который был известен больше своей бережливостью и хитрым деловым чутьем, чем благотворительностью, сказал о Вебере: «Я бы доверил мисс Вебер любую сумму денег, которая ей понадобится для создания любой картины, которую она захочет.Я был бы уверен, что она вернет его ».

Самым смелым фильмом Вебера была контрацептивная драма « Где мои дети? » (1916). Но не каждый фильм, который она сняла, боролся с противоречивыми темами. обычная драма, но каждый руководствовался особым моральным компасом, и каждый преподносил (тонко или открыто) какой-то моральный урок. Бесстрашная откровенность и окончательное понимание правильного и неправильного исходили от Вебера из ее опыта христианской миссионерской работы, подобной Армии Спасения. организация.В отличие от уличного прозелитиста, Вебер-режиссер не является деспотичным пропагандистом. Она вовлекает зрителя в эмоциональную ткань истории и формирует повествование таким образом, чтобы зритель пришел к своему собственному выводу.

Клякса (1921) рассказывает о финансовых трудностях семьи Григгс, патриарх которой Эндрю Теодор Григгс (Филип Хаббард) является недооцененным профессором местного колледжа. Его ученики, в первую очередь Фил Уэст (Луи Калхерн), — избалованные богатые дети, которым не хватает интеллектуального любопытства и которые также слепы к экономическому неравенству между собой и своим профессором.

Семья Григгсов живет по соседству с семьей шведских иммигрантов, которые преуспели, хотя и мало вносят вклад в мировое социальное благополучие (отец — сапожник). В то время как большинство кинематографистов изображают Олсенов как модель американского капитализма, Вебер изображает их неотесанными, бездумными потребителями, которые просто взбесились, чтобы проиллюстрировать широко распространенный сдвиг в американских приоритетах от идей к вещам .

Семья Григгс старательно скрывает свое тяжелое экономическое положение, вместе с миссис Дж.Григгс (Маргарет Маквэйд), которую в одном заголовке называют «Старой матушкой Хаббардом», взяла на себя большую часть бремени скупости. В конце концов, нехватка ресурсов в семье сказывается на дочери-подростке Амелии (Клэр Виндзор). Из-за отсутствия подходящей одежды для холодной погоды она заболевает. Когда доктор прописывает сытную, здоровую пищу, чтобы вылечить ее, миссис Григгс не может ее предоставить и начинает подумывать о краже одной из соседских кур … или того хуже. В строке, которая кажется чуждой зрителям 21-го века, на титульном листе мрачно говорится: «Она впервые решила залезть в долги.Она попросит кредита! »

Фил, избалованный богатый ребенок, влюблен в Амелию, навещает ее в их доме и, наконец, становится свидетелем бедности, которую так гордо скрывала семья. В одной искусно управляемой сцене Фил уходит. ватная двадцатидолларовая банкнота на столе, которую они могут найти позже. Зритель с нарастающим беспокойством наблюдает, как эта валюта — которая почти ничего не значила для Фила, но была бы колоссальной неожиданностью для семьи Григгс — остается незамеченной, отбрасывается , и в конце концов уносится в камин.

Наряду с профессором Григгсом, еще одной жертвой социальной несправедливости стал молодой пастор (в титрах не указан), который также любит Амелию. В другом блестяще снятом эпизоде ​​миссис Григгс тратит последние деньги семьи на формальный чай для Фила, стремящегося к успеху, когда он приезжает в гости. К тому времени, как закуска была подана, Фил ушел, и остался только преподобный. Удрученное выражение лица миссис Григгс не ускользает от пастора, который, таким образом, напоминает о его низком социальном статусе.

По-видимому, неспособные выбраться из бедности, семья Григгсов не теряет надежды, но стремится к чуду — или, возможно, более маловероятному — чтобы один из богатых светских людей развил совесть и увидел, что профессора и профессора мировые пасторы («люди, которые кормят свои души и одевают свой разум») получают надлежащую компенсацию.

Дар Вебера к визуальной метафоре проявляется в The Blot , особенно в использовании обуви. Обувь — источник чрезмерных доходов семьи Олсен, но эта семья, похоже, не ценит их ценности.Это убедительно иллюстрирует кадр, в котором малыш Олсенов играет в грязи с новой парой восемнадцатидолларовых туфель, в то время как миссис Григгс печально смотрит на свою разваливающуюся обувь. В другой сцене преподобный пытается скрыть свою бедность, натирая обувь гусиным жиром, и это к его большому смущению приводит к обратным результатам, когда собака настойчиво облизывает его обувь. Вебер эксплуатировала символическую ценность обуви и раньше в своем успешном фильме 1916 года « Shoes » (Мэри Макларен в главной роли в роли женщины, которая жертвует своим достоинством, чтобы купить пару туфель), и, несомненно, поняла, что могла бы получить немного больше. метафоры до того, как подошвы истончались.

Вебер был вдохновлен на создание The Blot после прочтения статьи «Обездоленное преподавание в колледже» в выпуске Literary Digest от 30 апреля 1921 года о недоплате преподавателям и духовенству (текст статьи играет эпизодическую роль. ближе к концу фильма). Затем вместе со сценаристом Марион Орт она создала мелодраматический рассказ, чтобы воплотить проблему в жизнь.

Согласно историку Энтони Слайду, Клякса была снята в основном на месте, в доме в еврейском районе Бойл-Хайтс.«Используя форму искусственного освещения, изобретенную ее оператором Далем Клоусоном вместе с Питом Харродом, режиссер смогла использовать настоящий дом в качестве дома профессора. Сцены из колледжа были сфотографированы в старом кампусе Калифорнийского университета на Вермонт-авеню. в Лос-Анжелес.» ( Лоис Вебер: Заблудившийся в истории режиссер, ). За время карьеры Вебера киноиндустрия превратилась из новаторской группы компаний, работающих в примитивных условиях, в строго регламентированную студийную систему, которая существует и сегодня.На протяжении всего этого быстрого развития Вебер демонстративно сохраняла свою художественную и политическую целостность. Несмотря на то, что ее фильмы будут выпускаться на крупных студиях (таких как Universal и Paramount), она боролась за достижение творческой независимости, чтобы, по ее собственным словам, снимать фильмы «так, как я хотел их снимать, а не по заказу». »

Вебер однажды озвучила свои социально-политические амбиции, заявив, что она стремится стать «редакционной страницей Universal Company».

По словам историка кино Шелли Стэмп, Вебер сознательно сопротивлялся движению индустрии к созданию студийного кинопроизводства в стиле сборочного конвейера.«Концентрируясь только на одной постановке за раз и мобилизуя всю свою рабочую силу вокруг этого усилия, Вебер стремилась к качественному кинопроизводству, а не к эффективной бухгалтерской отчетности».

Она и ее муж Филлипс Смолли основали Lois Weber Productions в июне 1917 года, автономный комплекс с офисами и съемочной площадкой площадью 12 000 квадратных футов. Вебера и Смолли часто называли совместно директорами, но именно жена явно обладала художественным видением, которое способствовало развитию делового партнерства.К тому времени, когда был выпущен The Blot , вклад Смолли засчитывался в более точной пропорции, поскольку он значился в титрах как «консультативный директор».

Независимость Вебера позволила ей снимать фильмы последовательно, как она предпочитала (а не вне графика, соответствующего производственному графику).

Студии, по-видимому, не имели с этим проблем, и они все еще боролись за распространение ее продукта. В 1920 году Вебер подписала контракт с Paramount на пять картин за 250 000 долларов, что сделало ее самым высокооплачиваемым режиссером в индустрии, а не женщиной-режиссером.

После выпуска Клякса , Разновидность провозгласила: «Она трогает сердце. Она разумно и разумно собрана вместе, указывает на стоящую мораль без оскорбительных проповедей и затрагивает живую тему. Кроме того, ее технические качества Актерский состав во главе с Клэр Виндзор, которая может действовать тонко и привлекательно и, кроме того, очень красива, адекватна во всем, а сюжет, режиссура, фотография и освещение радуют вас «. (19 августа 1921 г.).«Плодородный ум Лоис Вебер отвернулся от семейных проблем или сексуальных игр, чтобы бороться с экономической проблемой. Результат намного интереснее, чем можно было бы предположить», — сказал Мэтью А. Тейлор в Motion Picture News .

Не все критики проявляли такой энтузиазм. Мир движущихся картин подобрал и прочитал по разделам, такой способ построения рассказа допустим.