Разное

Цифра от 1 до 10 задания вк: Разработка игр — Ученикам

Содержание

Продвижение в Instagram самостоятельно

Явления массфолловинга и масслайкинга? Как к нему относится?

МЛ и МФ на сегодняшний день не «явление», а устоявшийся полноценный метод продвижения: в Instagram, VK, Twitter. Если останавливаться на механике, то процесс массового лайкинга и подписки — нормальный для любого, кто хочет получить больше контактов, а не только для маркетолога. Яркий пример тому LinkedIn. Думаю, все из нас пролайкивали перспективных работодателей или HR-специалистов, или наоборот — заинтересовавших нас кандидатов. МФ и МЛ — совершенно нормальные методы для любого специалиста, который хочет обратить на себя внимание, тем более что эти инструменты дают видимые результаты.

Мы обеспечиваем крайне дешевые рекламные контакты — возможность «дотянуться», «достучаться» до пользователей, которые в другой ситуации оказались бы недоступными исключительно в силу физической невозможности охватить в ручную большие аудитории. С помощью МЛ можно привлечь достаточно большое количество потенциальных клиентов или подписчиков для монетизации аккаунта. Но, для того чтобы получить очевидный результат, придется ставить несколько сотен лайков в день, а это затруднительно делать вручную.

Фактически, мы говорим об оптимизации процедур, которые можно выполнять руками. Искать пользователей, которым может быть интересен ваш продукт, добавлять их, писать в директ и т. д. Мы облегчаем жизнь большому количеству специалистов, которые работают с Instagram — частным предпринимателям, СММ-специалистам, digital маркетологам за крайне вменяемые деньги — это и есть наш бизнес. И он честный.

Наказывает инстаграм за массфолловинг или масслайкинг или нет?

Крайняя мера наказания со стороны Instagram — вечный бан. Согласно нашей статистике, если сравнивать с ситуаций 2016−2017 гг, на сегодня эта мера воздействия на пользователей практически не применяется. Показатель вечных банов среди наших клиентов — 0,03%, это вполне в рамках статистической погрешности, поэтому мы не боимся озвучивать эти цифры. При использовании МФ и МЛ встречаются также временные блокировки.

Что касается нашего сервиса, то мы сами предлагаем пользователям оценить и выбрать для себя степень рисков, с которыми он готов работать. Сервис Instaplus.me позволяет выбрать интенсивность продвижения: полностью безопасную, нормальную и очень быструю 🙂 Последняя, конечно же, может сказаться небезопасной. Но, мы абсолютно честно предупреждаем об этом пользователей непосредственно в приложении.

Нужно ли применять массфоловинг и масслайкинг и если да, то как?

Если быть предельно объективным, то это зависит от цели продвижения. Если клиент, ставить цель получить сотни тысячи подписчиков за относительно короткий срок, скажем полгода, то необходимо обратить внимание на другие методы, такие как массовая реклама у популярных аккаунтов.

Следует помнить, что МФ и МЛ — не панацея. Все зависит от конкретных целей, которые стоят перед бизнесом — что вы продаете и для кого, используя свой аккаунт в Instagram. МФ И МЛ позволяют быстро набирать активных подписчиков, превращать их в клиентов и таким образом использовать для последующей монетизации аккаунта в Instagram. У МФ и МЛ есть вполне очевидные преимущества: быстрая раскрутка аккаунта, возможность привлекать исключительно свою ЦА, высокая конверсия. МЛ может быть применим, если цель — поднять лояльность подписчиков, «пролайкав» их новые фотографии.

Не стоит ограничиваться только МФ и МЛ. Для полноценного продвижения бизнеса в интернете этого не достаточно. Стоит обратить внимание и на другие направления: PPC, SEO, PR.

структурные и качественные изменения – Учительская газета

Летом 2021 года в Конституцию Российской Федерации был внесен объемный пакет поправок. Многие из них носили ценностный характер. Так, новая статья 67.1 закрепляла в Основном законе, что «Российская Федерация чтит память защитников Отечества, обеспечивает защиту исторической правды». Для российских педагогов и классных руководителей тема памяти подвига советского народа в период Великой Отечественной войны всегда была, есть и будет актуальной. В этом году ФИOКО решил отразить в заданиях ВПР этот важный аспект. Во всех классах появился новый тип заданий, связанный с Великой Отечественной войной.

Помимо качественной модернизации новой модели ВПР, в 2022 году нас ждет ее определенная структурная перестройка. Рассмотрим по порядку данные изменения в содержании всероссийских проверочных работ в каждом классе.

Структурные изменения ВПР

В прошлые годы выполнение всероссийских проверочных работ учащимися создавало определенные организационные неудобства. В восьмом классе написание работы составляло 90 минут, но вместо двух уроков дети реально справлялись за 50-60 минут и сидели в коридоре, ожидая уроков по расписанию. В 6 и 7 классах на это отводилось 60 минут или полтора урока.

Педагог, который организовывал написание работы учащимися, вынужден был пропускать два урока. Дети, заканчивая выполнение работы, должны были еще полчаса, а то и больше, ждать следующий урок. А руководство школы ломало голову над тем, как выстроить расписание в «день ВПР», чтобы все прошло гладко и без сбоев. ФИОКО принял во внимание этот аспект и в пятом классе сохранило, а в шестых, седьмых и восьмых сократило время выполнения работ до 45 минут. Это удобно и учителям, и учащимся, и администрации образовательных учреждений.

Сокращение времени на выполнение работы было бы невозможным без уменьшения числа заданий. В 2022 году ФИОКО провел масштабное сокращение количества заданий во всех классах. Рассмотрим эти изменения.

Какие номера не значатся в новых списках ВПР

В пятом классе всероссийская проверочная работа была сокращена на два задания. Речь идет о №7, №8 по старой классификации, которые проверяли знания важнейших событий истории региона или населенного пункта учащихся.

В шестом классе ВПР лишилась сразу четырех заданий. Это задание №6 на проверку умения соотносить географический объект с тем или иным историческим событием, процессом и объяснять, в чем заключалась связь между ними. Из новой версии ВПР в 6 классе убрали задание №7, которое проверяло умение определять значение события или процесса для истории России. Не стало задания №9, которое в различных моделях проверяло умение учащихся соотносить памятник культуры с событиями из истории России, либо с географическим объектом. Как и в пятом классе, убрали задание с региональным компонентом (№10 по старой классификации).

В седьмом классе всероссийская проверочная работа лишилась сразу пяти заданий. Это – задание на определение исторического периода, когда произошло то или иное событие из отечественной истории и его соотнесение с хронологией событий зарубежных стран (задание №8). Из ВПР исчезло задание №10 (модель 1), которое проверяло умение определять хронологию исторических процессов или событий, указывать факты, которые их характеризовали. Также не стало задания № 11 (модель 1 и 2), которое позволяло продемонстрировать учащимся понимание значения (важных последствий) исторических процессов или событий в истории нашей страны. Как и в 5, 6 классах убрали задание с региональным компонентом (№12 по старой классификации).

В восьмом классе из ВПР убрали четыре задания. Во-первых, это задание №2, где нужно было по описанию определить и вписать историческое понятие. Во-вторых, это задания №11, 12, где нужно было указать исторический процесс или событие, в котором участвовал исторический деятель, затем –  два факта, которые бы характеризовали это событие или процесс, и, наконец, определить его значение для отечественной истории. Кроме того, как и в других классах, убрали задание с региональным компонентом (№13 по старой классификации). Незначительной модернизации подверглось задание №1, где добавился элемент из истории зарубежных стран.

Структурная перестройка модели ВПР коснулась каждого класса. Возможно, это связано с отказом от исторического сочинения в ЕГЭ по истории. Многие сокращенные задания, по сути, представляли собой элементы исторического сочинения из единого государственного экзамена. Во всех классах исчезли задания, которые связаны с региональным компонентом.

Качественные изменения

Что же предлагает нам ФИОКО взамен заданий, от которых отказались? Рассмотрим новые типы заданий, которые появились в ВПР 2022.

Во всех классах появляются новые задания, связанные единой тематикой Великой Отечественной войны. Они проверяют понимание значимости данного события, знание элементарных фактов, которые связаны с ним: даты, имена, ключевые события. Издательство «Экзамен» недавно выпустило сборники вариантов ВПР для каждого класса (с 5 по 8). Они содержат актуальные задания, которые можно использовать при подготовке учащихся к сдаче ВПР. Возьмем несколько примеров новых заданий, опираясь на данные сборники.

Например, в пятом классе предлагается вот такое задание:

7. Рассмотрите изображение и выполните задание

Укажите название войны, в ходе которой был учрежден данный орден. Почему необходимо противостоять попыткам искажать правду об этой войне?

Задание включает изображение (фотографию, марку, плакат, орден), связанное с тематикой Великой Отечественной войны, и два вопроса к нему. Первый вопрос носит репродуктивный характер и предполагает проверку знания фактов о Великой Отечественной войне (даты, имена, события).

Второй вопрос проверяет умение анализировать и рассуждать. Учащимся надо объяснить важные ценностные аспекты, связанные с памятью о войне. Например, в данном задании учащимся предлагается обосновать необходимость борьбы с фальсификацией события Великой Отечественной войны.

Рассмотрим еще один пример из сборника ВПР издательства «Экзамен» для 6 класса.

8. Рассмотрите изображение и выполните задание

Назовите войну, в годы которой совершили трудовой подвиг труженики тыла, которым посвящена данная почтовая марка. Объясните, почему труд тружеников тыла в годы этой войны называют подвигом.

Задание выстроено по тому же принципу. Репродуктивный вопрос на знание факта или термина и задание на объяснение о вкладе тружеников тыла в Великую Победу.

Похожее задание находим и в сборнике ВПР издательства «Экзамен» для 7 класса.

9. Рассмотрите изображение и выполните задание

Укажите название мемориала, запечатленного на фотографии. Почему День Победы является священным праздником для всех жителей нашей страны.

Аналогичная заданию для 5, 6 классов структура. Задание сочетает проверку фактологического материала и ценностных аспектов. Оно не только проверяет знания, но и ориентирует ребенка на размышления о связи истории и современности, о значимости Подвига, который совершили его предки.

В шестом классе появилось новое задание №7, которое направлено на проверку знания фактов истории российской культуры.

7. В создании каких из перечисленных памятников культуры участвовал монах Киево-Печерского монастыря Нестор? Выберите два памятника и запишите в таблицу цифры, под которыми они указаны.

1) «Житие Сергия Радонежского»

2) «Слово о погибели русской земли»

3) «Житие Бориса и Глеба»

4) «Слово о полку Игореве»

5) «Повесть временных лет»

 

7. В каких из перечисленных памятников культуры отражены события, произошедшие в XIII в.? Выберите два памятника и запишите в таблицу цифры, под которыми они указаны.

1) «Повесть о житии Александра Невского»

2) «Хожение за три моря»

3) «Песня о Щелкане Дудентьевиче»

4) «Повесть о разорении Рязани Батыем»

5) «Слово о полку Игореве»

Как мы видим, в обоих заданиях необходимо выбрать два из пяти представленных названий памятников культуры по заданному критерию. Подготовка к данному заданию требует тщательного изучения учащимися истории культуры: необходимо помнить хронологию появления основных памятников культуры, их авторов, общий сюжет или внешний вид и т.д.

В восьмом классе, помимо задания появляются две модели последнего задания №10. Одна модель предполагает выполнение задания, которое посвящено памяти народа России о Великой Отечественной войне, а вот вторая модель – это задание, которое посвящено важнейшим событиям истории нашей страны в XXI в. Рассмотрим пример такого задания:

10. Рассмотрите изображение и выполните задание.

Укажите год, когда выпущена данная медаль. Почему произошло событие, годовщине которого посвящена данная медаль?

Данное задание обращено к событиям, которые происходили при жизни восьмиклассников. Представления о них они формировали через СМИ, классные часы, в обсуждениях со сверстниками, родителями, родственниками. Задание предполагает демонстрацию учениками фактических знаний и умения объяснять причины и следствия событий, которые происходили совсем недавно. Задания ориентированы не на предметные знания учеников, а на их социальный опыт, вовлеченность в современную политику, экономику, заинтересованность судьбами государства, народа.

Воспитательный потенциал ВПР

Что объединяет новые задания ВПР с 5 по 8 класс? Это тематика Великой Отечественной войны в заключительном задании. С точки зрения предмета, данную тему проходят в 10 классе, либо в колледже. Однако с точки зрения российской культуры она универсальна для любого возраста. «Мы помним, мы гордимся!» – эти слова не требуют объяснения. Каждый россиянин прекрасно понимает, о чем идет речь. Данные задания ВПР можно использовать не только при подготовке к самой работе, но и на классных часах, связанных с темой патриотизма, сохранения исторической памяти, уважительного отношения к героическим событиям нашей истории.

В восьмом классе в последнем задании появляется вторая модель, которая предполагает обращение к знаковым событиям современной истории. Задание несет в себе важный мировоззренческий аспект. Дети в возрасте четырнадцати-пятнадцати лет начинают интересоваться политикой своего государства. Многие из них с большим интересом читают, слушают, смотрят средства массовой информации.

Но им еще порой не хватает навыков критического мышления, которые позволяли бы адекватно воспринимать поступающую информацию: отделять факты от оценочных суждений, не воспринимать все на веру, руководствуясь только мнимым ореолом авторитетности и честности источника получения знаний. Работа с такими заданиями позволяет учащимся обратиться вместе с педагогом к серьезным, а порою и противоречивым событиям современной истории. Научиться критически воспринимать различные варианты их интерпретации. Данные задания также рекомендуются к использованию на классных часах, а не только при подготовке к ВПР.

Иван Хеорхе — учитель истории и обществознания Гатчинской гимназии имени К.Д. Ушинского, сопредседатель Ассоциации молодых педагогов Ленинградской области, лауреат всероссийского конкурса «Учитель года» – 2020, победитель всероссийского конкурса «Учитель будущего» – 2020. 

ВК-1600В — экономичнее, легче, дешевле

ВК-1600В – это перспективный двигатель, разрабатываемый «ОДК-Климов» и предназначенный для установки на вертолет Ка-62, а также другие многоцелевые и специальные вертолеты взлетной массой 5-8 тонн. Взлетная мощность -1400 л.с., удельный расход топлива – 200 г/на л.с. в час, поставочная масса — 210 кг. При этом двигатель имеет запас форсирования около 10-15%.

В настоящий момент основные аналоги двигателя, которые имеются на рынке, это: двигатели семейства PT-6 (Pratt & Whitney, Канада) — самое массовое семейство турбовальных двигателей в этом классе, LHTEC Т800 СП Rolls-Royce Holdings Plc. и Honeywell Aerospace, США-Великобритания), Ardiden (Safran, Франция) и MTR390 (СП Safran-MTU-RR, Франция-Германия-Великобритания). Интересен тот факт, что все перечисленные двигатели созданы каждый по своей конструктивной схеме.  Эта особенность класса двигателей обусловлена противоречивым комплексом требований: простота конструкции и ремонта при низком удельном расходе топлива и стоимости жизненного цикла.

На презентации ОДК были приведены сравнительные характеристики ВК-1600В и двигателя Ardiden 3G (Safran), который в данный момент устанавливается на вертолет Ка-62. По своим характеристикам они очень близки, потому что двигатель ВК-1600В создается в рамках программы импортозамещения, и перед ОДК стоит задача не только создать конкурентоспособный двигатель, но и обеспечить все параметры, которые определяют взаимозаменяемость ВК-1600В и Ardiden. Двигатели имеют одинаковые места стыковки с объектом, а также такие характеристики, как частота вращения вала, масса и габаритные размеры.

«Мы впервые в истории российского авиадвигателестроения применили конструкторскую документацию в виде трехмерных моделей с аннотацией. В результате при сборке демонстратора мы получили такое преимущество, как гарантированная актуальность моделей в системе, содержащей немалое количество информационных объектов. Кроме того, мы обеспечили контроль стыковки объектов как внутри двигателя, так и внутри мотогондолы, что позволило обеспечить совпадение стыковочных размеров между всеми элементами двигателя», — рассказывает и.о. заместителя главного конструктора ВК-1600 Антон Колосов.

Для сокращения сроков технологической подготовки производства в двигателе-демонстраторе были активно использованы аддитивные технологии. С помощью 3D-печати изготовлены корпуса первой опоры, корпуса опор свободной турбины и турбины компрессора. Кроме того, аддитивными методами изготовлены заготовки для колец рабочих колес компрессора, сопловой аппарат – все 4 ступени, а также рабочие лопатки турбины компрессора.

Благодаря применению современных цифровых технологий проектирования опытного образца, темпы создания двигателя очень высокие. Оформление технического задания было завершено в 2019 году, в том же году был подготовлен эскизный проект, а в самом начале 2020 года завершены процедуры по его защите. Осенью 2020 года была оформлена конструкторская документация на двигатель-демонстратор.

И вот в середине 2021 года мы уже видим собранный двигатель-демонстратор на стенде ОДК на авиасалоне МАКС. Хочется надеяться, что набранный темп не будет потерян, ведь, согласно озвученным планам, получение сертификата типа запланировано на 2023. Параллельно с ОКР в рамках программы планируется проведение подготовки серийного производства и создание системы послепродажного обслуживания (ППО).

А дальше предстоит следующий этап работы – расширение спектра применения двигателя. Как рассказал Антон Колосов, «ОДК-Климов» рассматривает возможность применения двигателя и на других объектах – на многоцелевых и специальных вертолетах. «Кроме того, нами запланировано создание его турбовинтовой модификации для самолетов региональной пассажирской и транспортной авиации. Также самолетная версия может быть применена в составе учебно-тренировочного самолета. Двигатели семейства могут быть применены и в составе БПЛА как самолетного, так и вертолетного типа. Мы также можем на базе газогенератора двигателя создать мобильные энергетические установки номинальной мощностью до 1,2 МВт для использования в различных условиях», – подытожил Антон Колосов.

Двигатель-демонстратор  ВК-1600В  был изготовлен в широкой кооперации предприятий ОДК: это производственный комплекс «ОДК-Салют», который изготавливал коробку приводов с маслобаком; ММП Чернышева изготавливало компрессорную часть и первую опору; ОДК-УМПО – горячую часть двигателя, за исключением более наукоемких элементов, которые за собой оставил разработчик-«ОДК-Климов» – это турбина высокого давления — роторная часть, диски и лопатки турбины компрессора, элементы электронной системы автоматического управления и сборка. Кроме того, в проекте участвует «Редуктор-ПМ» и предприятия малой кооперации.

При проектировании двигателя ВК-1600В была выбрана схема с двухступенчатым центробежным компрессором, двухступенчатой охлаждаемой для обеспечения требований топливной экономичности турбиной компрессора, и двухступенчатой свободной турбины. Такая схема позволяет обеспечивать взаимозаменяемость с двигателем Ardiden 3G, создание простой системы автоматического управления и топливной системы для снижения трудоемкости изготовления и обслуживания, а также стоимости жизненного цикла. Упрощение САУ связано, в первую очередь, с отсутствием необходимости регулирования проточной части. Соответственно, перечень агрегатов и количество деталей, обеспечивающих регулирование компрессора, значительно снижается.

При разработке двигателя был определен ряд концептуальных ограничений, которые позволили обеспечить упрощение работ по монтажу двигателя и сокращение трудоемкости его обслуживания.  Так, например, в техническом задании сформулировано требование об автономности масляной системы, а по системе автоматического управления – обеспечение дополнительного функционала гидромеханического резерва.

Для двигателя в целом были выбраны умеренные уровни параметров, так как срок выполнения работ достаточно сжат и существует необходимость свести технический риск к минимуму. Поэтому была выбрана максимально простая модульная конструкция с применением традиционных материалов и технологий. Но там, где это экономически и технологически целесообразно, используются и новые, например, аддитивные технологии.

Наиважнейшим вопросом для обеспечения конкурентоспособности двигателя является и организация системы послепродажного обслуживания (ППО). В этом российские производители быстро развиваются и учитывают этот аспект уже на начальном этапе создания. Ведь современный двигатель вообще не может существовать в отрыве от такой системы, так как именно она определяет экономические показатели продукта. Разработчиком определены основные критерии такой системы: время простоя техники – не более трех дней; стоимость летного часа на уровне зарубежных конкурентов; время оказания консультаций при обращении – не более 10 минут; 100%-ая доступность актуальных версий эксплуатационной технической документации для эксплуатантов и выезд мобильных ремонтных бригад в течение суток.

ОДК-Климов запустил электронный портал, который обеспечит доступность актуальной версии ЭТД (эксплуатационной технической документации), электронный сбор данных для увеличения надежности и безопасности полетов. В рамках системы ППО планируется создание сети технических центров, в том числе на базе уже существующих центров для ремонта двигателей ТВ3-117/ВК-2500, и в мобильном формате в виде передвижной установки, в которой будет предусмотрен весь набор оборудования, необходимый для оперативного обслуживания двигателя. Запланировано формирование подменного фонда, который позволит эксплуатантам в рамках услуг ППО получить двигатель как в случае его повреждения, так и при проведении регламентных ремонтных работ. Это обеспечит минимальное время простоя техники.

Самолетная версия турбовинтового двигателя ВК-1600С будет такой же взлетной мощности, что и вертолетная, но, если потребуется, мощность может быть увеличена до 1800 л.с. Удельный расход топлива – 202 гр. на л.с. в час. Этот параметр демонстрирует лучшую топливную экономичность двигателя в классе. Подписание технического задания на создание такого двигателя планируется уже в текущем году. По плану в 2024 году будет изготовлен двигатель-демонстратор, в 2025 году будут начаты летно-конструкторские испытания, а сертификацию планируется завершить в 2026 году.

анализ активности и информационных предпочтений аудитории – тема научной статьи по СМИ (медиа) и массовым коммуникациям читайте бесплатно текст научно-исследовательской работы в электронной библиотеке КиберЛенинка

ВЕСТН. МОСК. УН-ТА. СЕР. 10. ЖУРНАЛИСТИКА. 2016. № 1

НОВЫЕ МЕДИА

О.В. Дьяченко, выпускница аспирантуры кафедры новых медиа и теории

коммуникации факультета журналистики МГУ имени М. В. Ломоносова; email: [email protected]

РОССИЙСКИЕ СМИ В СОЦИАЛЬНЫХ СЕТЯХ

FACEBOOK И В «ВКОНТАКТЕ»: АНАЛИЗ АКТИВНОСТИ

И ИНФОРМАЦИОННЫХ ПРЕДПОЧТЕНИЙ АУДИТОРИИ

Данная статья посвящена анализу активности аудитории сообществ российских СМИ в социальных сетях «Facebook» и «ВКонтакте». На основе изучения обширного массива данных составлен рейтинг успешности работы российских СМИ в социальных сетях и анализируются публикации, вызвавшие наибольшее внимание у пользователей соцсетей в 2014г.

Ключевые слова: СМИ, социальные сети, сообщества, «ВКонтакте», Facebook.

The article deals with the Russian mass media audience activity in social networks Facebook and VKontakte. A ranking of Russian mass media effectiveness in social networks has been created. The author analyzes the most popular in social networks articles of 2014.

Key words: mass media, social networks, communities, VKontakte, Facebook.

Введение

Сайты социальных сетей (сокр. соцсети) можно по праву назвать одним из самых ярких феноменов сети Интернет за последнее время. За сравнительно небольшой период, начиная с их расцвета в 2003 г., они коренным образом изменили процессы коммуникации в глобальной Сети [Boyd, Ellison, 2007; Beer, 2008]. Охват аудитории, новые формы общения, которые позволяют пользователям легко обмениваться мультимедийным контентом и выражать свое отношение к нему при помощи комментариев и функций «нравится» и «поделиться», а также скорость распространения информации, привлекли на страницы сайтов соцсетей не только обычных пользователей, но и различные организации, в том числе СМИ.

Сегодня сообщества на страницах соцсетей стали неотъемлемой частью аудитории современных российских СМИ. Эти сообщества выступают в роли пространства, где происходит непрерывное интерактивное общение между СМИ и аудиторией.

Количество подписчиков отдельных сообществ российских средств массовой информации в соцсетях превышает миллион человек («РИА Новости» и «Нэшнл Географик» в «ВКонтакте», «Ве-сти.ру» и «РИА Новости» на «Facebook»), и некоторые СМИ публикуют в день до 50, а иногда даже и более постов («Газета.ру» и «Правда.ру», «Российская газета», «Спортс.ру»). Пользователи оставляют в день десятки тысяч комментариев и отметок «like» (нравится) к этим публикациям, тысячи раз используют функцию «share» (поделиться), чтобы оценить материалы, которые СМИ разместили на своих страницах, и оповестить о них своих друзей.

Анализируя взаимодействие российских СМИ и социальных сетей, исследователь имеет возможность обратиться как к зарубежным учебным пособиям, статьям и публичным выступлениям, так и к публикациям отечественных специалистов. Все они подчеркивают фундаментальный характер изменений, произошедших в результате развития социальных сетей.

В изученных автором англоязычных источниках говорится, в частности, о значимости «Фэйсбук» (Facebook) и «Твиттер» (Twitter) как источников журналисткой информации [Castells, van der Haak, Parks, 2012], так и каналов для ее распространения, а также о новых ролях (модератора, менеджера по работе с сообществом, издателя), которые необходимо освоить профессиональному журналисту в связи с их развитием1.

В рассмотренных автором публикациях отечественных специа-листов2 анализируются взаимодействия именно российских СМИ

1 Андерсон К. Фундаментальные технологические тренды Форум «Медиа Будущего». — М.: РИА Новости, 2013; Lavrusik V. The Future of Social Media in Journalism. — Mashable, 2010. — URL: http://mashable.com/2010/09/13/fUture-social-media-journalism; Lavrusik V., Cameron B. Analysis: How News Pages Are Keeping Readers Engaged. — Facebook, 2011. — URL: https://www.facebook.com/notes/facebook-journalists/analysis-how-news-pages-are-keeping-readers-engaged/249876705024351; Lavrusik V., Cameron B. How Journalists Are Using Facebook Subscribe. — Facebook, 2012. — URL: https://www. facebook.com/notes/facebook-journalists/how-journalists-are-using-facebook-subscribe/352565928088761; Newman N. The rise of social media and its impact on mainstream journalism. — Reuters Institute for the Study of Journalism, 2009. — URL: https://reutersinstitute.politics.ox.ac.uk/fileadmin/documents/Publications/The_rise_of_ social_media_and_its_impact_on_mainstream_journalism.pdf; Overholser. J. What Is Journalism’s Place in Social Media? — Nieman Reports, 2009. — URL: http://www.nieman. harvard.edu/reportsitem.aspx?id=101882; Grabowicz P. The transition to digital journalism. Facebook and Social Media. — UC Berkeley Graduate School of Journalism, 2013. — URL: https://multimedia.journalism.berkeley.edu/tutorials/digital-transform/social-networks/

2 Гатов. В. Новая сетевая реальность. Форум «Медиа Будущего». — М.: РИА Новости, 19 июня 2012; Панченко Е. Интеграция Интернет-СМИ и социальных сетей в Рунете: Новая публичная сфера или пространство контроля? — Digital Icons, 2011. — URL: http://www.digitalicons.org/issue05/files/2011/05/Panchenko-5.6.pdf

с социальными сетями и осмысливается роль соцсетей в формировании публичной сферы и политического дискурса в России, а также возникающие в связи с этим проблемы.

Также интересны рейтинги «цитируемости» российских СМИ в соцсетях, подготовленные Brand Analytics3 и Медиалогия4. Их объединяет анализ, основанный на широком фактографическом материале, однако в центре внимания находятся не сами публикации СМИ в соцсетях, а количество упоминаний тех или иных изданий и материалов на этих сайтах.

В этой связи особенно интересным представляется осмысление феномена взаимодействий российских СМИ с социальными сетями, которое основывалось бы на анализе публикаций, которые СМИ размещают в своих сообществах в соцсетях, а также реакции пользователей на эти публикации. Тем более, что в современных медиаисследованиях сегодня еще не создано фундаментальных научных трудов, в которых были бы пристально рассмотрены все аспекты происходящих процессов именно в этом разрезе.

В настоящей работе автор предпринимает попытку углубить и расширить научное знание о взаимодействии российских СМИ с аудиторией в пространстве социальных сетей. Была поставлена цель определить круг российских СМИ, наиболее успешно взаимодействующих с аудиторией в соцсетях «Фэйсбук» и «ВКонтак-те», и выявить характерные черты в информационных предпочтениях аудитории сообществ этих СМИ в изучаемых социальных сетях.

Для достижения поставленной цели была использована комплексная методика, сочетающая количественный анализ большого объема данных с элементами контент-анализа. Такое объединение количественных и качественных исследовательских методов позволит сформировать представление о наиболее выраженных чертах процесса коммуникации российских СМИ с аудиторией в социальных сетях и выявить наиболее значимые закономерности в распределении внимания аудитории соцсетей по отношению к тем или иным публикациям СМИ.

В статье автор пытается решить следующие задачи с целью достижения поставленных целей:

3 Что читают в Рунете. Составлен рейтинг самых цитируемых в соцсетях изданий за 2014 год. — Lenta.ru, 2015. — URL: http://lenta.ru/articles/2015/01/14/baitog/

4 СМИ в соцмедиа — I квартал 2015. — Медиалогия, 2015. — URL: http://www. mlg.ru/company/pr/3494/

♦ Выявить наиболее популярные российские СМИ в социальных сетях и найти основания для их сравнения.

♦ Определить метрики, позволяющие составить представление о наиболее успешных практиках взаимодействий российских СМИ с аудиторией в пространстве социальных сетей «Фэйсбук» и «ВКонтакте», и описать их применение к исследуемым в настоящей работе сообществам российских СМИ.

♦ Понять, какие темы привлекли наибольшее внимание у подписчиков сообществ российских СМИ в 2014 г.

♦ Выявить отличия между информационными предпочтениями аудитории российских СМИ в пространстве социальных сетей Facebook и «ВКонтакте».

Методология

В статье приводятся результаты исследования активности подписчиков российских СМИ в социальных сетях Facebook и «ВКонтакте. И хотя в России функционируют и другие социальные сети, такие как «Одноклассники», «Гугл+» (Google+), «Мой мир» и т.п., выбор именно этих площадок был обусловлен несколькими причинами.

Так, Facebook является крупнейшей мировой социальной сетью по количеству зарегистрированных пользователей. то есть представляет собой самое популярное и масштабное воплощение феномена социальных сетей в мире c количеством зарегистрированных пользователей, превышающим 1,3 млрд человек. По данным системы мониторинга Brand Analytics, российская месячная аудитория этой соцсети в ноябре 2014 г. составляла порядка 24 млн человек5.

Однако в России эта соцсеть уступает по популярности «ВКон-такте», которая является наиболее многочисленной по количеству пользователей соцсетью в Российской Федерации. Ежемесячная аудитория этого сайта за тот же период составляла 54,6 млн человек, из них более 65% проживают в России6. Также на выбор повлиял тот факт, что именно в этих двух соцсетях российские СМИ

5 Социальные сети в России, зима 2014—2015. Цифры, тренды, прогнозы // Brand Analytics, 2015. — URL: https://br-analytics.ru/blog/socialnye-seti-v-rossii-zima-2014-2015-cifry/

6 Аудитория ВКонтакте // ВКонтакте.ру, 2015. — URL: https://vk.com/about? w=page-47200925_44240810

имеют наиболее популярные по количеству пользователей сообщества. Более того, в некоторых регионах России в 2015 г. соцсеть «ВКонтакте» превзошла по охвату аудитории такие федеральные телеканалы, как «Первый канал» или «Россия 1»7, что подчеркивает актуальность изучения взаимодействия российских СМИ с этой социальной сетью.

Для изучения активности аудитории и контента была использована оригинальная методика, заимствующая новейшие инструменты интернет-маркетинга. В список этих инструментов входят сервисы расширенной онлайн-статистики по сообществам и группам в социальных сетях, создание которых стало возможным, благодаря использованию API (англ. application programming interface — интерфейс прикладного программирования) социальных сетей. API соц-сетей — это набор различных функций, констант, классов, форматов запросов, которые можно использовать в других программах. С их помощью разработчики создают для подобных сервисов статистики программный код, который позволяет извлекать данные непосредственно с сайтов социальных сетей, что гарантирует достоверность полученной информации.

Для решения поставленных исследовательских задач была применена методика, использующая (обрабатывающая и группирующая) данные «Системы Ниппель». Выбор данной методики был обусловлен опытом плодотворного сотрудничества с создателем сервиса, российским разработчиком и специалистом по маркетингу в социальных сетях А. Цверовым, а также разрешением безвозмездного использования данных для поставленных в настоящей работе исследовательских задач. Полученные при помощи «Системы Ниппель» данные были структурированы и обработаны в таблицах программы Microsoft Excel.

Поскольку настоящая статья является продолжением многолетней работы автора по изучению взаимодействия российских СМИ с социальными сетями, то в выборку сообществ для анализа вошли, в первую очередь, сообщества, рассмотренные в предыдущих научных публикациях автора [Дьяченко, 2014; 2014]. Также для получения наиболее актуальной картины список анализируемых сообществ СМИ был расширен еще несколькими сообществами, которые обладали на момент исследования наибольшим (в сравнении с другими российскими СМИ) количеством подпис-

7 Городников А. «ВКонтакте» обогнал федеральные телеканалы // [email protected] Mail.ru, 2015. — URL: https://hi-tech.mail.ru/news/vk-vs-tv.html

чиков, то есть представляли собой самые показательные примеры взаимодействия СМИ с социальными сетями. Из исследования были исключены сообщества развлекательных радио- и телеканалов. В результате эмпирическую базу исследования составили мультимедийные материалы, опубликованные в пространстве социальных сетей «ВКонтакте» и «Facebook», 49 российскими СМИ.

Анализировались публикации следующих средств массовой информации: «The Village», «Аргументы и факты», «Афиша», «Большой город», «Ведомости», «Вести.ру», «Вог», «Вокруг света», «Газета.ру», «Гео», «Гламур», «Деловой Петербург», «ДжиКью», «Дождь», «Евроньюс», «Живи», «Интерфакс», «ИТАР-ТАСС», «КоммерсантЪ», «Комсомольская правда», «Космополитен», «Лента.ру», «Лук эт ми», «Максим», «Медуза», «Мотор.ру», «Мэнс Хелс», «Наука и жизнь», «Новая газета», «НТВ», «Нэшнл Географик», «Первый канал», «Популярная механика», «Правда.ру», «РБК», «РИА Новости», «Роллинг Стоун», «Российская газета», «Русский репортер», «Слон.ру», «Сноб», «Спортс.ру», «Таймаут», «Форбс», «Эксперт», «Эль», «Эсквайр», «Эхо Москвы», а также сообщество «Лентач» в соцсети «ВКонтакте», которое до смены руководства СМИ в марте 2014 г. являлось официальным сообществом «Ленты.ру» на этом сайте.

Хронологические рамки исследования охватывают период с 1 января 2014 г. по 25 марта 2015 г., причем, для исследования публикации дополнительно разделены на два периода:

— анализ публикаций СМИ в соцсетях и действий, совершенных пользователями по отношению к ним с 1 января 2015 г. по 25 марта 2015 г., позволяет определить наиболее успешные практики взаимодействия СМИ с соцсетями на настоящий момент времени;

— анализ публикаций СМИ в соцсетях и действий, совершенных пользователями по отношению к ним с 1 января 2014 г. по 31 декабря 2014 г., позволяет сформировать представление о «главных событиях 2014 г.» — иными словами, определить тренды в восприятии пользователями соцсетей информации СМИ за годовой период.

Общее количество материалов объясняется задачами настоящего исследования, которые подразумевают формирование представления о самых заметных трендах и наиболее явных закономерностях в области этого нового и не нашедшего еще достаточного отображения в отечественной журналистской науке процесса.

Результаты исследования

Поскольку одной из задач настоящего исследования являлся поиск основания для сравнения нескольких десятков сообществ самых различных СМИ в соцсетях, то для первого шага в данной работе стало необходимым их сгруппировать, что было произведено на основании информационных запросов, которым удовлетворяют изучаемые СМИ.

Так, некоторые из анализируемых сообществ освещают самый широкий круг актуальных тем, то есть являются политематическими и рассчитанными на самый широкий круг аудитории. В их ряду можно назвать сообщества новостных, общественно-политических и деловых СМИ, а также сообщества информационных агентств. Их характерной чертой является предоставление и анализ событийной информации, то есть информирование аудитории о новостях в самых различных сферах жизни.

Другие носят специализированный характер и ориентированы на разные социо-демографические группы и интересы аудитории. Так, например, они могут быть ориентированы на женскую или мужскую аудитории, на автовладельцев, на жителей крупных городов, на интересующихся путешествиями, наукой или музыкой и т.п. К ним относятся так называемые СМИ «образа жизни», «глянцевые» издания, научно-популярные, музыкальные СМИ и другие. Для них в меньшей степени характерно предоставление общей актуальной информации по важнейшим событиям в стране и мире, и в большей — освещение тем, интересных для определенного сегмента целевой аудитории.

В связи с разным характером удовлетворяемых информационных запросов в настоящем исследовании было предпринято условное разделение изучаемых сообществ СМИ на «новостные» (в число которых также вошли сообщества общественно-политических и деловых изданий, теле- и радиоканалов, интернет-СМИ и информационных агентств) и «специализированные». Соотношение «новостных» и «специализированных» СМИ в исследовании оказалось достаточно сбалансированным: 29 к 23.

Далее представилось важным определить, в каких из исследуемых сообществ СМИ аудитория наиболее активна — это позволило бы выяснить, какие СМИ наиболее эффективно взаимодействуют с аудиторией в своих сообществах в соцсетях. Ведь сегодня, в ситуации изобилия средств массовой информации, каждому из них приходится бороться за интерес и лояльность читателей, зри-

телей, слушателей — а «лайки», комментарии и «репосты» в социальных сетях как раз и служат проявлением заинтересованности и/или одобрения.

Так как в российской науке о журналистике ранее не вводились критерии оценки эффективности коммуникации СМИ с аудиторией в соцсетях, было принято решение обратиться к использованию принятой в мировой практике маркетинга в социальных сетях метрики под названием «индекс вовлеченности страницы» (англ. «page engagement rate»).

В мировой обиход подобная метрика была введена одним из самых авторитетных в области социальных сетей аналитическим порталом «Соушалбейкерс» (Socialbakers.com)8.

Ранее для оценки успешности того или иного сообщества в со-цсетях использовались методики, имеющие в основе либо подсчет количества подписчиков этого сообщества, либо подсчет количества «интеракций» (суммарного значения отметок «нравится», «поделиться», комментариев и других пользовательских действий, примененных к публикациям этих сообществ) за определенный период времени. Однако такой метод оценки не позволял сравнивать между собой активность аудитории в сообществах разного (по количеству подписчиков) масштаба.

Инновационная метрика «индекса вовлеченности» страниц, введенная Socialbakers, позволила разрешить эту проблему: формула расчета этой метрики учитывает одновременно и количество подписчиков, и количество интеракций к публикациям сообщества, совершенного пользователями соцсети за определенный период времени. Так выглядит общая формула расчета индекса вовлеченности (ИВ) сообщества, применяемая современными специалистами по маркетингу в социальных сетях:

Количество интеракций за анализируемый период

ИВ = —:- + количество дней в анализируемом периоде х 100

Количество подписчиков за анализируемый период

Данная формула была применена для выявления сообществ российских СМИ в социальных сетях «Facebook» и «ВКонтакте», наиболее успешно вовлекающих аудиторию в интерактивное общение. Для этого при помощи «Системы Ниппель» были извлечены данные обо всех публикациях анализируемых сообществ и количестве интеракций к ним в период с 1 января 2015 г. по 25 марта

8 Engagement Rate: A Metric You Can Count On // Socialbakers, 2013. — URL: http://www.socialbakers.com/blog/1427-engagement-rate-a-metric-you-can-count-on

2015 г., а также замерено количество подписчиков этих сообществ на 25 марта 2015 г. и произведен расчет по представленной формуле. На основе полученных результатов был составлен рейтинг сообществ СМИ для каждой из соцсетей, в котором сообщества были расположены в порядке убывания показателя «индекса вовлеченности». Такое исследование позволило получить самые актуальные знания о том, какие российские СМИ успешнее других ведут работу по взаимодействию с аудиторией в соцсетях.

Результат подобного анализа показал, что в обеих социальных сетях наибольший уровень вовлеченности аудитории на сегодняшний день характерен для сообществ СМИ, отнесенных в настоящем исследовании к категории «новостных» (см. табл. 1, табл. 2). Это, в частности, может свидетельствовать о том, что аудитория этих социальных сетей проявляет наибольшую заинтересованность именно в публикациях, носящих новостной характер и повествующих о важнейших общественно-политических и экономических событиях России и мира.

Таблица 1

Сообщества российских СМИ в соцсети «Facebook» с наибольшим «индексом вовлеченности страницы» по данным на 25.03.2015

Место в рейтинге СМИ !йп СМИ Количество подписчиков на 25.03.2015 Количество инте-ракцийс 01.01.2015 по 25.03.2015 Индекс вовлеченности страницы

1 «Правда. ру» новостн. 93933 1089305 13,80549612

2 «Комсомольская правда» новостн. 353761 3924891 13,20803957

3 «Российская газета» новостн. 76890 765201 11,84749085

4 «НТВ» новостн. 468460 2997688 7,617888807

5 «Первый канал» новостн. 563368 3530046 7,45948601

6 «ИТАР-ТАСС» новостн. 311708 1836125 7,012534472

7 «Дождь» новостн. 800477 4096989 6,093076824

Окончание таблицы 1

8 «Нэшнл Географик» специал. 527474 2671482 6,029369626

9 «Эль» специал. 268119 1240310 5,507105143

10 «Аргументы и факты» новостн. 358904 1227267 4,070815992

Таблица 2

Сообщества российских СМИ в соцсети «ВКонтакте» с наибольшим «индексом вовлеченности страницы» по данным на 25.03.2015

Место в рейтинге СМИ !йп СМИ Количество подписчиков на 25.03.2015 Количество инте-ракцийс 01.01.2015 по 25.03.2015 Индекс вовлеченности страницы

1 «Лентач» новостн. 713907 5384629 8,979142

2 «Эхо Москвы» новостн. 43397 287260 7,880180

3 «НТВ» новостн. 139817 752369 6,406069

4 «Медуза» новостн. 61547 331114 6,404591

5 «Газета. ру» новостн. 98007 517696 6,288375

6 «Новая газета» новостн. 38995 126796 3,870948

7 «Вести. ру» новостн. 125845 358745 3,393678

8 «РИА Новости» новостн. 1341499 3708543 3,291044

9 «Мэнс Хелс» специал. 318830 825314 3,081632

10 «Правда. ру» новостн. 198214 429818 2,581493

Особенно интересными полученные результаты представляются в свете исследования, опубликованного информационно-аналитической системой «Медиалогия». В нем в виде рейтинга были представлены наиболее цитируемые в I квартале 2015 г. в соцсетях российские СМИ, и «тройку лидеров» составили сообщества

«РИА Новости», «Лента.ру» и «Газета.ру»9. Рейтинг был построен по количеству ссылок на сообщения СМИ, размещенных пользователями в своих учетных записях в социальных сетях «ВКонтак-те» и «Facebook», а также на микроблоговой платформе «Twitter».

Так, оказалось, что ни одно из трех наиболее цитируемых в 1 квартале 2015 г. российских СМИ не вошло в топ-10 СМИ по уровню вовлеченности на «Facebook», и только два из них вошли в десятку лучших по этому показателю — «ВКонтакте» — однако, и здесь они не возглавили список. Таким образом, внимание российских пользователей к контенту СМИ и их готовность поделиться этим контентом на своих страницах в социальных сетях, не означают их готовность в то же время взаимодействовать с контентом, размещаемым этими же СМИ непосредственно в самих соцсетях.

Также примечательно, что в разных соцсетях на верхних позициях рейтинга оказались различные СМИ. Подобный результат может быть обусловлен, в том числе, различием аудиторий этих социальных сетей, разными социо-демографическими характеристиками подписчиков сообществ СМИ. Так, согласно данным исследования gemiusAudience fusion Russia, опубликованным авторитетным отраслевым порталом «Состав.ру», несмотря на общую лидирующую возрастную группу «25-34» в обеих соцсетях, на «Facebook» большее количество пользователей имеет высокий доход, высшее образование и проживает в столице. В то же время, пользователи «ВКонтакте» проводят значительно больше времени и просматривают значительно больше страниц, чем в иностранной соцсети10.

В результате проведенного исследования удалось выяснить, что активность пользователей социальных сетей «ВКонтакте» и «Facebook» распределяется по-разному между контентом различных российских СМИ на этих сайтах, что приводит к разному количеству пользовательских «интеракций», совершенных по отношению к постам этих СМИ. Также удалось узнать, что состав российской аудитории различается между собой в этих соцсетях по многим признакам. Это позволило предположить, что различия обнаруживаются не только в СМИ, взаимодействию с сообществами которых аудитория отдает предпочтение на этих сайтах, но и

9 СМИ в соцмедиа — I квартал 2015 // Медиалогия, 2015. — URL: http://www. mlg.ru/company/pr/3494/

10 Сравнение аудиторий Facebook и VK.com (ИНФОГРАФИКА) // Состав.ру, 2014. — URL: http://www.sostav.ru/publication/sravnenie-auditorij-facebook-i-vk-com-infografika-9682.html

в событиях, освещаемых в публикациях этих СМИ, и вызвавших наибольший отклик пользователей «ВКонтакте» и «БаееЪоок».

Чтобы проверить эту гипотезу, был предпринят анализ наиболее популярных публикаций СМИ, отнесенных ранее к категории «новостных», в этих социальных сетях за годовой период — с 1 января. по 31 декабря 2014 г. В каждом сообществе на основе данных, извлеченных при помощи «Системы Ниппель» были определены 3 публикации с наибольшим количеством интеракций, и было проанализировано, каким именно событиям посвящены эти публикации. Таким образом, из всей массы публикаций изучаемых СМИ, размещенных в социальных сетях в 2014 г., было выделено и проанализировано 78 самых популярных публикаций в сообществах «новостных» СМИ в «ВКонтакте» и 75 — на сайте «БаееЪоок».

Далее было предпринято изучение отобранных публикаций. В каждой из них была определена тема, событие или проблема, которой она посвящена. Было замечено, что некоторые из тем повторяются — иногда в пределах одной социальной сети, иногда — сразу и в «ВКонтакте» и на «БаееЪоок». Публикации схожей тематики были сгруппированы в соответствии с проблемой или событием, о которых они повествуют. При этом значительная часть публикаций была отнесена к группе «Другое»: в ней, в частности, были объединены посты сугубо развлекательного характера (например, тесты или картинки с цитатами великих людей прошлого, которые не повествуют ни о каком значимом событии современности). Также к ней были отнесены публикации «на отвлеченную тему» (например, сообщения о событиях из жизни редакции), и новостные сообщения на темы, не вызвавшие такого сильного отклика у аудитории других сообществ СМИ. Количество публикаций, вошедших в группу «Другое» для «БаееЪоок» и «ВКонтакте» составило 30 и 38 подобных постов соответственно.

Показательные отличия были выявлены в других группах тематических публикаций, которые вызывали наибольшую реакцию аудитории. Причем, отличаются не только списки этих тематических групп, но и их «удельный вес» по отношению к другим — то есть сумма интеракций к постам одной тематики по отношению к публикациям на другие темы.

Такое различие в количестве интеракций особенно важно из-за механизмов распространения информации в социальных сетях: большое количество действий к посту в соцсети позволяет ему до-

стигнуть большого количества пользователей за короткий период времени. Так, из-за особенностей функционала формирования «Ленты Новостей» на «Facebook» каждый «лайк», «комментарий» или «share» к публикации, размещенной СМИ в своем сообществе, повышает ее шансы на попадание в ленты новостей других пользователей, даже не подписанных на сообщество того или иного СМИ. В социальной сети «ВКонтакте» для такого быстрого распространения контента среди пользователей служит, в первую очередь, функция «поделиться»: благодаря ей публикация СМИ охватывает не только подписанных на сообщество читателей, но и их друзей по соцсети, которые, в свою очередь, также могут продолжить распространять публикацию уже среди своих друзей.

Это, прежде всего, позволяет посту, собравшему большое количество пользовательских действий, достигнуть эффекта «вирусно-сти».

Изначально термин «медиа-вирус» был введен в 1994 г. американским специалистом в области средств массовой коммуникации Д. Рашкоффом [Рашкофф, 2003] и обозначал «медиасобытия, вызывающие подлинные социальные перемены». В данной работе под «вирусным контентом» подразумевается более распространенная в современном словоупотреблении трактовка термина, которую дает, например, популярный американский словарь технических терминов TechTerms.com. Согласно ему, термин «вирусный» (англ. — viral) относится к «цифровому видео, изображению или статье, которые пережили «вспышку популярности» и достигли большого количества пользователей за короткий период времени»11. Нет точного числа просмотров, которое позволило бы назвать тот или иной контент «вирусным», но в среднем наиболее популярные вирусные материалы собирали более миллиона просмотров меньше, чем за неделю12.

При этом наиболее интересной чертой «вирусности» оказывается тот факт, что главным распространителем информации являются сами получатели информации: «лайки», «перепосты» и комментарии привлекают к контенту, размещенному СМИ в своих сообществах в соцсетях, все новых и новых пользователей. И, учитывая количество пользователей, ежедневно потребляющих контент СМИ в социальных сетях на сегодняшний день, можно утверждать, что подобные «вирусные» публикации и темы могут

11 Viral — Definition — TechTerms.com. — URL: http://www.techterms.com/ definition/viral

12 Ibid.

оказывать существенное влияние на формирование повестки дня у этих пользователей. Результаты проведенного анализа были представлены в виде таблиц, отсортированных в порядке убывания суммы пользовательских действий к изучаемым публикациям (см. табл. 3, табл. 4).

Таблица 3

Тематика наиболее популярных публикаций российских СМИ в соцсети «Facebook» в 2014 г.

Тематика Сумма действий к публикациям Количество публикаций

Другое 258735 30

Зимние Олимпийские игры в Сочи 194185 12

Состояние здоровья Жанны Фриске 138325 5

Празднование Дня Победы 94862 2

Кризис на Украине 85192 11

Селфи Дмитрия Медведева 31456 2

Чемпионат мира по хоккею 2014 29901 2

Состояние здоровья Михаэля Шумахера 17098 2

Вхождение Крыма в состав Российской Федерации 12486 2

Санкции и контр-санкции 10486 2

Экономический кризис в России 6318 3

Чемпионат мира по футболу 2014 2618 1

Вручение кинопремии Оскар 38 1

Общий итог 881700 75

Таблица 4

Тематика наиболее популярных публикаций российских СМИ в соцсети «Вконтакте» в 2014 г.

Тематика Сумма действий к публикациям Количество публикаций

Другое 323080 38

Вхождение Крыма в состав Российской Федерации 177177 5

Окончание таблицы 4

Экономический кризис в России 57603 2

Кризис на Украине 48228 13

Зимние Олимпийские игры в Сочи 41274 5

Санкции и контр-санкции 9089 5

Чемпионат мира по хоккею 2014 8645 3

Состояние здоровья Жанны Фриске 7262 1

Чемпионат мира по футболу 2014 4536 3

Вручение кинопремии Оскар 1655 1

Крушение малайзийского самолета под Донецком 1230 2

Общий итог 679779 78

Очевидно, что наиболее популярные публикации СМИ на «БасеЪоок» относились в основном к триумфам отечественных спортсменов, торжествам, а также подробностям жизни знаменитостей. При этом значимые общественно-политические события страны, такие как последствия введения международных санкций, финансово-экономический кризис в России или изменение ее территориальных границ, замыкают составленный список.

Для «ВКонтакте» сложилась противоположная ситуация — на вершине рейтинга оказались публикации СМИ, посвященные самым «болезненным» общественно-политическим событиям страны и мира. Наибольшее внимание пользователей привлекли такие темы, как вхождение Крыма в состав Российской Федерации, экономический кризис в стране, а также события, связанные с кризисом на Украине.

Отдельно было рассмотрено, насколько большую долю пользовательских действий (а значит, и пользовательского внимания) привлекли различные темы анализируемых публикаций, и отобразили обнаруженные закономерности в форме наглядных кольцевых диаграмм, исключив из списка анализируемых записей публикации, отнесенные к теме «Другое» (см. рис. 1, рис. 2).

Рис. 1. Распределение количества пользовательских действий к темам самых популярных публикаций российских СМИ в соцсети «¥асвЬоок»

в 2014 г.

Рис. 2. Распределение количества пользовательских действий к темам самых популярных публикаций российских СМИ в соцсети «ВКонтакте»

в 2014 г.

Таким образом, удалось не только узнать, какие темы привлекли наибольшее внимание у подписчиков сообществ российских СМИ в социальных сетях в 2014 г., но и выявить существенные отличия между информационными предпочтениями у аудитории

российских СМИ в пространстве социальных сетей «Facebook» и «ВКонтакте».

Подводя итог данному анализу, необходимо отметить, что при определении самых популярных тем новостей на основе количества пользовательских действий в соцсетях нельзя забывать о проблеме киберпреступников, владеющих большим количеством фальшивых аккаунтов в социальных сетях. Такую позицию в частности высказал в своем выступлении на форуме «Медиа будущего» вице-президент Гильдии издателей периодической печати и руководитель Медиа Лаборатории, созданной совместно с РИА Новости, В. Гатов. По мнению специалиста, эти люди «могут влиять на новостную картину дня, ставя «Like» на интернет-страницах с информацией, угодной преступникам, а не на тех материалах, которые действительно интересуют аудиторию конкретного СМИ»13.

Выводы

В результате проведенного исследования удалось собрать обширный объем данных о взаимодействии российских СМИ с аудиторией в соцсетях «Фейсбук» и «ВКонаткте». Применив специальные методики и метрики, заимствованные из практики специалистов по маркетингу в социальных сетях, стало возможным упорядочить полученные знания и составить представление о том, какие российские СМИ в настоящий момент успешнее других ведут работу по взаимодействию с аудиторией в пространстве этих сайтов.

Так, было замечено, что в целом публикации именно «новостных» СМИ в социальных сетях оказываются наиболее привлекательными для пользователей. У аудитории сообществ этих СМИ как на «Facebook», так и во «ВКонтакте» сегодня наблюдается наибольший индекс вовлеченности, а значит, именно практику этих СМИ можно назвать наиболее успешной.

При этом, в разных социальных сетях верхние места рейтинга занимают разные СМИ, а нижние — одни и те же. Так, в социальной сети «ВКонтакте» лучшими стали «Лентач», «Эхо Москвы», «НТВ», «Медуза» и «Газета.ру», а на нижних строках рейтинга находятся «Форбс», «Мотор.ру», «Таймаут», «Русский репортер» и «Евроньюс». На «Facebook» же наиболее вовлеченной оказалась аудитория сообществ «Правды.ру», «Комсомольской правды», «Российской газеты», «НТВ» и «Первого канала», а наименее во-

13 Гатов. В. Новая сетевая реальность. Форум «Медиа Будущего». — М.: РИА Новости, 19 июня 2012.

влеченной — страниц «Мотор.ру», «Форбс», «Евроньюс», «Делового Петербурга» и «Русского репортера».

Проведенный анализ самых популярных публикаций позволил определить, какие темы привлекли наибольшее внимание у подписчиков сообществ российских СМИ. В 2014 г. такими темами стали украинский кризис и присоединение Крыма к Российской Федерации, а также финансовый кризис в России, введение санкций западными странами и ответные меры российского правительства. Кроме того, в этот список вошли крупнейшие спортивные события — чемпионаты мира по хоккею и футболу и Зимние Олимпийские игры в Сочи. Также внимание аудитории привлекли события из жизни отечественных и зарубежных знаменитостей.

Однако внимание аудитории к этим темам распределилось по-разному на «Facebook» и в «ВКонтакте»: в российской социальной сети реакция аудитории в большей мере была направлена на самые «острые» и спорные темы, а в западной — на позитивные события и выдающиеся достижения.

В целом выбранные инструменты и методика анализа показали себя эффективными и позволили полностью выполнить поставленные в начале настоящей работы исследовательские задачи. В будущем они могут лечь в основу дальнейших исследований, результаты которых будут иметь большое значение как для научного сообщества, так и для профессиональных отечественных журналистов.

Список литературы

Дьяченко О.В. Методика исследования сообществ российских СМИ в социальной сети «ВКонтакте» // Меди@льманах. — 2013. — № 4. — С. 16-23.

Дьяченко О.В. Российские СМИ в социальных сетях Facebook и в «ВКонтакте»: практики взаимодействия // Медиаскоп. — 2014. — № 4.

Рашкофф Д. Медиавирус. Как поп-культура тайно воздействует на ваше сознание / Пер. с англ. Д. Борисов. — М.: Ультра Культура, 2003.

Beer D. Social network(ing) sites…revisiting the story so far: A response to Danah Boyd & Nicole Ellison // Journal of Computer-Mediated Communication. — 2008. — Vol. 13. — Is. 2.

Boyd D., Ellison N. Social Network Sites: Definition, History, and Scholarship // Journal of Computer-Mediated Communication. — 2007. — Vol. 13. — Is. 1.

Castells M., van der Haak B., Parks M., The Future of Journalism: Networked Journalism // International Journal of Communication. — 2012. — № 6.

Поступила в редакцию 30.06.2015

VK для бизнеса: как продвигаться на площадке

Сегодня «ВКонтакте» – самая большая по охвату социальная платформа в Рунете. На ней можно найти практически любые товары и услуги, которые успешно продвигают различные компании из b2c-сегмента и многих направлений b2b. Сейчас платформа переживает новый виток популярности, поэтому грамотно прокаченное сообщество в соцсети позволит компаниям с минимальными затратами привлекать новых клиентов.

В этой статье я расскажу, как правильно воспользоваться возможностями соцсети, какие преимущества и недостатки она имеет, и можно ли эффективно продвигать бизнес-сообщество без помощи профильных специалистов.

«ВКонтакте» стала самой популярной площадкой по активности авторов и количеству публикаций в феврале и марте 2022 года. Дневная аудитория социальной сети в России выросла за месяц почти на 10% и превысила 50 миллионов пользователей. В связи с блокировками зарубежных платформ и соцсетей бизнес и пользователи будут продолжать мигрировать на отечественную площадку. Если у вас еще нет аккаунта во «ВКонтакте», пора его создать.

С чего начать?

Часто пользователи не хотят создавать дополнительные группы или сообщества под свой бизнес, поэтому пытаются адаптировать под эту цель личный аккаунт, добавляя друзей и размещая на странице информацию о своих товарах и услугах. Но личный аккаунт нельзя рекламировать. Также в нем отсутствует ряд полезного для бизнеса функционала, а за массовый фолловинг друзей или рассылку сообщений, аккаунт могут заморозить. Поэтому для предложения товаров или услуг от компании в сети я рекомендую создать сообщество.

Для плодотворного продвижения бизнеса во «ВКонтакте» идеально подойдет сообщество или публичная страница. Прежде чем создавать площадку стоит определить цель проекта и, какие задачи он будет выполнять на платформе. Подумайте о принципах взаимодействия с аудиторией, какую информацию вы планируете транслировать потенциальным и существующим клиентам, какие пользовательские проблемы поможете решить. То есть сначала вам нужно создать концепцию сообщества. На платформе при нажатии кнопки «Создать сообщество» соцсеть предложит вам возможные варианты. К каждому из них есть пояснения, чтобы пользователю было легче сориентироваться, какой формат нужен именно ему.

  1. «Публичная страница» и «Бизнес» — основные форматы для продвижения. Их суть заключается в формировании лояльной аудитории компании/бренда, участники которой могут общаться, обмениваться контактами, а также покупать товары и услуги.
  2. «Тематическое сообщество» — публичная страница. В рамках такого формата можно публиковать новости по определенной тематике — это один из возможных инструмент продвижения, а также анализировать активность пользователей.
  3. «Бренд или организация» — публичная страница, ориентированная на сообщества узкой тематики.
  4. «Группа по интересам» — сообщество, объединяющее людей по схожим увлечениям. Такую страницу можно скрыть и приглашать в нее только определенных пользователей. Если вы хотите размещать User Generated Content (контент от пользователей) в ленте от аккаунтов участников (например, сообщество с объявлениями), то группа не подойдет. Здесь участники не смогут предлагать записи для размещения, в отличие от публичной страницы.
  5. «Мероприятие» — формат-оповещение людей о предстоящем событии. В рамках такого раздела можно приглашать аудиторию на определенные мероприятия. Например, открытие выставки, премьера фильма или старт обучающих курсов.

При оформлении отдельное внимание уделите обложке вашего сообщества, ведь от визуала зависит привлекательность канала. Также заполните его описание, рекомендую его сделать информативным и развернутым, поскольку публичные страницы индексируются поисковыми системами, а подробная информация о группе позволит потенциальным клиентам найти вас. Не забудьте добавить контактную информацию на страницу бизнеса.

Как привлечь клиентов?

Видимых недостатков у «ВКонтакте» нет, а вот преимущества каждый выделит для себя самостоятельно. Площадка заточена под бизнес и располагает широким пулом инструментов для продвижения. Среди основных способов привлечения клиентов в соцсети можно выделить следующие три:

  • Таргетированная реклама — классический вариант продвижения. Объявления транслируются аудитории социальной сети в новостной ленте, в историях, клипах или в виде баннеров под левым меню. Рекламные объявления ориентированы на аудиторию с определенными схожими критериями (возраст, геолокация, пол, место работы, интересы). Есть даже возможность выбрать браузер, которым потенциальный клиент пользуется, или показывать объявления людям из какого-либо определенного паблика.
  • Промо-посты представляют собой продвижение выбранных публикаций в новостной ленте. Такой формат позволяет разместить в посте прямую ссылку на сайт/лендинг и направить туда трафик. Аналогично можно привлекать пользователей в сообщество, публикуя адрес вашей группы.
  • Реклама в сообществах подразумевает публикацию объявлений в популярных группах и на публичных страницах через маркет-платформу (специальный сервис, позволяющий покупать рекламу на стенах крупных сообществ, подключенных к этой платформе). Этот тип продвижения подойдет для привлечения внимание подписчиков конкретных сообществ. При грамотном выборе сообщества можно недорого получить большое количество клиентов.

Несмотря на большую конкуренцию «ВКонтакте», продвинуть группу или сообщество на площадке возможно даже без опыта. Для этого достаточно комбинировать различные методы и технические решения.

Помимо платных форм продвижения добавляйте бесплатные — вовлекайте аудиторию за счет полезного информационного контента, а также используйте развлекающий, например, игры, конкурсы и акции. Такие форматы увлекают подписчиков, они становятся активнее и лояльнее, а вы получаете дополнительный трафик за счет распространения вашего контента участниками сообщества. Также на платформе доступна опция публикации подкастов, и это дополнительный и эффективный инструмент для продвижения, поскольку аудиоформат становится все популярнее.

Помимо уже описанных выше инструментов, для продуктивной работы рекомендую использовать чат-боты. Виртуального менеджера можно запрограммировать на различные диалоги, в которых он сможет автоматически давать ответы пользователям на интересующие их вопросы. Например, если аудитория часто спрашивает о стоимости доставки, то добавьте в чат-бот сообщение, где будут прописаны условия доставки. Пользователи получат информацию автоматически, после того, как введут в чат слово «доставка». Интегрировать ботов можно для переписки с аудиторией в сообществах, личной переписке с пользователями, а также их можно обучить общению в комментариях к публикациям.

Также привлечь дополнительную аудиторию можно за счет размещения ссылки на сообщество во внешних источниках. Если у вас есть корпоративный сайт, то разместите ссылку на группу там, а также в подписи в электронной почте, или добавьте при e-mail рассылке. Еще набрать аудиторию бесплатно можно при использовании взаимного пиара с другими сообществами. Смысл такого продвижения заключается в обмене полезными постами, куда нативно интегрирована ссылка на ваше сообщество. Для такого формата не нужно сотрудничать с конкурентами, выбирать нужно сообщества с похожей тематикой.

Можно ли продвигаться самостоятельно?

За счет правильных настроек реклама в социальной сети может в разы увеличить продажи вашего бизнеса, а для качественного и регулярного продвижения важно изучить правила платформы, понять, какие инструменты наиболее эффективны конкретно для вашей ниши, а также, как работают те или иные алгоритмы.

Например, в рекламном кабинете площадки есть критерий «Заинтересованная аудитория». Он проводит аналитику среди тех участников, которые лайкают публикации, делают репосты и читают посты в вашем сообществе. Умный алгоритм вычисляет взаимосвязи между такими аудиториями сообществ, создает похожие и воспроизводит рекламу им.

Если ранее вы накрутили подписчиков за счет ботов и офферов, то есть такие пользователи не являются вашей заинтересованной аудиторией, то алгоритм умной ленты и рекламного кабинета может сбиться, а бюджет просто будет слит. Но если вы разбираетесь в том, как действует алгоритм, размещаете релевантные посты, вовлекаете аудиторию, настраиваете таргет на горячую аудиторию конкурентов, и потом запускаете трафик на заинтересованную, то вы сэкономите время, и скорее всего получите хороший результат.

«ВКонтакте» — эффективная площадка для развития бизнеса с многомиллионной аудиторией, готовой покупать. Стоит ли привлекать профессионалов к настройке рекламы на платформе и комплексному продвижению страницы? Решать только вам. В зависимости от того, какого размера ваш бизнес, какие потребности присущи вашей аудитории и, какие задачи стоят перед группой, можно нанять штатного специалиста или сотрудничать с фрилансерами.

Начинающие предприниматели часто занимаются продвижением самостоятельно, а государственные и крупные частные компании делегируют создание контента и его продвижение агентствам, поскольку существуют задачи, требующие определенных профессиональных навыков и целой команды.

На фоне блокировки зарубежных площадок, сегодня платформа стала стимулом к развитию для многих сервисов, что уже помогло им поднять уровень своей востребованности и значительно увеличить количество контактов с пользователями. На мой взгляд, при грамотном подборе инструментов, «ВКонтакте» может стать успешным трамплином для развития практически любого бизнеса.

Читайте также:

ГБУ ДО Центр «Интеллект» — официальный сайт

В рамках реализации ФП «Успех каждого ребенка» и ФП «Кадры для цифровой экономики» информируем педагогов и учащихся о возможности принять участие во Всероссийском онлайн-проекте «Использование верифицированного цифрового контента в олимпиадной подготовке учащихся» в рамках программы поддержки и развития одаренных и талантливых школьников Ленинградской области

Проект направлен на решение следующих задач:

  • Повышение квалификации педагогов по работе с талантами.
  • Эффективная подготовка учащихся к участию в перечневых олимпиадах, в том числе муниципальном этапе ВсОШ 2022/2023 уч.года.
  • Повышение качества обучения за счет использования автоматизированной аналитики: отслеживание в онлайн-режиме успехов учащихся в цифровой среде (качество выполнения заданий конкретным учеником и всем классом и тд).
  • Повышение цифровой грамотности педагогов: овладение навыком использования верифицированного цифрового контента в предметном обучении, в том числе педагогов со слабой компьютерной грамотностью.

Программа повышения квалификации педагогов проводится в формате онлайн-интенсива в период с 28 марта по 19 мая 2022 года.

Участие в программе учащихся и педагогов полностью бесплатное.

Для участия в программе педагоги могут зарегистрироваться до 30.03.2021 г. по ссылке https://talant.foxford.ru/

По завершении программы педагогам выдается удостоверение установленного образца о повышении квалификации по работе с одаренными детьми.

Школьники 5–11-х классов общеобразовательных учреждений смогут принять участие в интенсивной онлайн-подготовке к муниципальному этапу ВсОШ 2022/23 по 7 предметам: русский язык, математика, английский язык, биология, физика, химия, информатика и программирование — под руководством педагогов предметного обучения в рамках программы повышения квалификации «Использование верифицированного цифрового контента в олимпиадной подготовке учащихся».

Обучение проводится на базе верифицированного образовательного контента олимпиадных курсов «Фоксфорд» для учащихся 5-11-х классов. Чтобы получить бесплатный доступ к контенту «Фоксфорд» необходимо зарегистрироваться (педагоги и учащиеся) на проекте «Цифровой образовательный контент» по ссылке https://educont.ru/

Самарские инспекторы проверят слюну «неадекватных» водителей на хроматографе

Члены областной межведомственной комиссии по обеспечению безопасности дорожного движения обсудили новые меры борьбы с «неадекватными» водителями. В регионе намерены приобрести новую технику. С её помощью сотрудники ГИБДД смогут оперативно выявлять водителей, которые управляют машинами, будучи в состоянии наркотического опьянения. Для оперативного выявления наличия психо-активных веществ предлагается использовать специальный хроматограф.

(Для справки: Хроматография метод разделения и анализа смесей веществ. Основан на распределении веществ между двумя фазами — неподвижной (твёрдая фаза) и подвижной (газовая или жидкая фаза). Ключевым элементом является система детектирования. В задачи системы входит отслеживание физических и физико-химических процессов и их преобразование в электрический сигнал, который передается на цифровое устройство. Детектор может измерять общее количество тех или иных компонентов в смеси, в данном случае — количество ПАВ в слюне водителя). 

Ранее главный автоинспектор региона озвучил цифры «дорожной статистики». Согласно данным, за 2022 год в регионе зарегистрировано 330 дорожно-транспортных происшествий. Количество пострадавших — 428, погибших — 32.

Эти показали ниже по сравнению аналогичного периода прошлого года. 

Тем временем, стали известны подробности аварии с участием большегруза и маршрутного автобуса, которая произошла в Самарской области. Есть пострадавшие. Об этом сообщили в прокуратуре Чапаевска. 

Напомним, все случилось в четверг, 31 марта, на улице 1-я Дачная. Водитель автомобиля «МАЗ», двигаясь по проезжей части, выбрал небезопасную дистанцию до ехавшего впереди автобуса «Peugeot». В результате чего и произошло столкновение. По информации городской прокуратуры, в дорожном происшествии пострадали 4 человека, из которых госпитализированы женщина и 11-летний ребенок. Еще двум пассажиркам была оказана медицинская помощь. 

Одна из пострадавших пассажирок вышла на связь с ГТРК «Самара» и поделилась подробностями аварии. 

Инспекторы ГИБДД сообщили  о том, что в Самарской области 1 апреля временно закроют для передвижения трассу М-5 Урал. В период с 10:00 до 13:00 нельзя будет проехать по участку трассы с 58 км (+350) по 70 км (+200) — от села Домашка до села Утёвка.

Что такое ВК? 8 вещей, которые вы должны знать о российском Facebook

Обычно, когда мы думаем о социальных сетях, мы думаем о Facebook — в конце концов, он связан почти со всем в нашей жизни, от поездок с Uber до голосовых вызовов и денежных переводов. Однако, если вы живете в России, вы, скорее всего, в первую очередь подумаете о vk.com, также известном как ВКонтакте. Это одна из ведущих российских социальных сетей; любой, чей кто-либо использует его.

В западном мире мало что можно прочитать о ВКонтакте, что делает этот сайт чем-то вроде загадки для тех, кто не в курсе.Если вы никогда раньше не слышали о ВКонтакте, вы скоро получите много шума.

Кредит изображения: Statista

Поскольку Facebook занимает четвертое место (после ВКонтакте и других популярных социальных сетей Одноклассники и Инстаграм), у ВКонтакте есть почти двукратное преимущество над ближайшим конкурентом по количеству ежемесячных сообщений и постов, которыми обмениваются пользователи.

По данным Alexa, ВКонтакте является третьим по посещаемости сайтом в России после Google и YouTube; ежедневная мобильная аудитория сайта достигает в среднем почти 45 миллионов посетителей.

2. ВКонтакте более популярен среди молодых пользователей

Кредит изображения: ResearchGate

Большинство пользователей ВКонтакте находятся в возрасте от 25 до 34 лет. Это интересный демографический клин, на который стоит обратить внимание, учитывая, что пользователям Facebook в основном от 35 лет и старше.

Вот некоторые возможные объяснения этой разницы:

  • VK фокусируется на обмене аудио- и видеофайлами между друзьями.
  • Тенденция сайта побуждать пользователей расширять свои социальные круги, а не оставаться только в тех, частью которых они уже являются.
  • Популярность социальной сети «Одноклассники» среди пожилых россиян.

3. VK предлагает много возможностей для создания профиля

Facebook как компания поощряет пользователей заполнять свои временные рамки последними событиями своей жизни, а не создавать чрезвычайно конкретный профиль с общей информацией о себе.

Это не относится к ВКонтакте — на самом деле, аспект создания профиля на сайте, честно говоря, более детализирован, чем что-либо, что мы когда-либо видели на любом сайте социальной сети, и точка.

Чтобы назвать один пример, процесс регистрации просит вас добавить свое образование в свой профиль. Я ожидал, что впишу название своего университета и двинусь дальше.

Этот веб-сайт фактически продолжал показывать мне список отдельных школ и колледжей в моем университете; некоторые из них были отделами, о которых даже я никогда не слышал.После этого он спросил меня о моей специальности и даже указал, какой акцент я выбрал для своей степени.

Этот уровень детализации распространяется почти на каждую часть вашего профиля. Собирая данные таким образом, ВКонтакте может объединить меня не только с другими выпускниками моего класса, проживающими в настоящее время в моем городе, но и с теми, кто конкретно участвовал в моей программе обучения.

4. ВКонтакте имеет сложную политическую историю

Как и Facebook, ВКонтакте был создан молодым человеком, только что окончившим колледж.Павел Дуров добился больших успехов, прежде чем в 2012 году столкнулся с проблемами с законом.

Многие группы активистов, враждующие с российским истеблишментом, часто использовали платформу как в качестве обычных пользователей, так и в качестве средства продвижения своих интересов. На просьбу навсегда забанить эти группы и отдельных лиц Дуров отказался.

Излишне говорить, что все усложнилось. В конце концов Дурова вынудили отказаться от своей доли в компании в 2014 году.Все досталось Алишеру Усманову, самому богатому человеку России того времени.

5. Российские пользователи считают, что VK лучше, чем Facebook

Назовите это здоровым чувством национализма или просто вопросом удобства, но большинство россиян просто предпочитают VK Facebook. Извини, Марк Цукерберг.

Дело не только в том, что ВК чаще используется в России. Согласно одному исследованию, любезно предоставленному немецким университетом имени Генриха Гейне, пользователи ВКонтакте считают его лучшим выбором, поскольку уровни указанной ценности в два раза выше, чем заявленные в пользу других брендов социальных сетей.Участники считали ВК более приятным и веселым, простым в использовании и в целом более надежным.

Связано: 20 лучших приложений и сайтов для социальных сетей в 202

6. ВКонтакте столкнулись с серьезными нарушениями безопасности

В июне 2016 года ВКонтакте фактически столкнулся со значительным нарушением безопасности, в результате чего были раскрыты данные более 171 миллиона пользователей.

Среди трофеев: имена, адреса электронной почты, пароли и другая конфиденциальная контактная информация, которая вскоре была продана в даркнете.ВК не первый и не последний. Тем не менее заставляет задуматься. Мы всегда должны быть осторожны в отношении того, чем мы делимся в Интернете, даже на таком огромном веб-сайте, как этот.

7. Самый распространенный пароль в ВК — «123456». Если вы виновны в этом, измените свой пароль сейчас.

Многие из этих украденных паролей были сохранены ВКонтакте в открытом виде, что позволило некоторым ученым-первопроходцам обработать цифры после крупного разлива.Они обнаружили, что более 700 000 человек использовали пароль «123456», а еще 400 000 — «123456789».

Другие популярные пароли включают «qwerty», «1111111» и «123321».

8. Дизайн сайта ВКонтакте редко меняется

На самом деле, судя по текущему дизайну веб-сайта ВКонтакте, можно предположить, что вы были на Facebook несколько лет назад.

Связано: Как вернуть старый макет Facebook… Это просто!

пользователей Facebook более чем знакомы с чувством, когда они просыпаются и заходят на совершенно другой веб-сайт, чем накануне. ВКонтакте гораздо больше контента для поддержания привычного дизайна сайта. Дизайнеры ВКонтакте объясняют свой выбор дизайна следующим образом:

Мы любим минимализм и простоту. Вот как [sic] выглядело вначале, и так оно выглядит сейчас.

Это блестящий идеал для жизни; ВКонтакте делает вещи удобными и последовательными, как старое одеяло.

Там есть мир за пределами Facebook

ВКонтакте — это обтекаемый и безмятежный опыт, далекий от тех, с которыми мы знакомы, и все акцентировано громкими и гордыми стилями TikTokers и влиятельных лиц Instagram, умирающих, чтобы сделать себе имя. самих себя.

Если у вас есть друзья в России или Украине, этот сайт — отличный способ связаться.Даже если вы этого не сделаете, наследие бренда предлагает жителям Запада сверхъестественный взгляд в зазеркалье. Мы могли бы поклясться, что смотрели на заставку Facebook примерно 2014 года сразу после входа в систему.

20 лучших приложений и сайтов социальных сетей в 2021 году

Читать Далее

Об авторе

Эмма Гарофало (опубликовано 379 статей) Более От Эммы Гарофало
Подпишитесь на нашу рассылку

Подпишитесь на нашу рассылку технических советов, обзоров, бесплатных электронных книг и эксклюзивных предложений!

Нажмите здесь, чтобы подписаться

RCMA Makeup VK Palette #11

Кейтлин Н.24 марта 2019 г.

Я фанат тональных средств, и, увидев, как Тати предлагает это на ее канале YouTube, я просто захотел купить это. Так я и сделал. Я впервые попробовала его влажным бьюти-блендером, погладила его и, посмотрев на свое лицо, подумала: «Боже мой, Тати, ты меня испачкала!»

Я был очень разочарован, но решил попробовать еще больше. Возможно, это была ошибка пользователя. Я начал заниматься исследованиями. Видимо, эта палетка волшебная, и я использовала ее неправильно. После просмотра видео Кевина Джеймса Беннета на YouTube о том, как наносить эту основу, мне не терпелось попробовать еще раз.Он сделал это так легко!

Я нанесла увлажняющий крем на лицо, смешала краски и капнула масла марулы на тыльную сторону ладони, нанесла на лицо пальцами, использовала сухую плотную кисть для равномерного распределения и нанесла больше, если больше нужно было покрытие. Я использовала его прямо из палетки для точечной коррекции и маскировки под глазами. Я все припудрил и отступил назад, чтобы посмотреть, как это выглядит.

Горячий черт! Конечно же, эта основа выглядит потрясающе. Отличный цвет, отличное покрытие, настраиваемый, без липкости, выглядит естественно и держится долго.Буквально все, что я когда-либо хотела от тонального крема. Не могу поверить, что мне понадобилось столько времени, чтобы найти такую ​​классическую основу.

Причина, по которой я поставил четыре звезды, заключается в том, что нет никаких объяснений тому, что в эту тональную основу входит гораздо больше, чем просто нанесение ее на лицо. Это считается палитрой «Pro», и она не была создана для того, чтобы погладить ее бьюти-блендером и нанести на лицо. Зная то, что я знаю сейчас, я съеживаюсь от этой мысли. Итак, что нужно учитывать при выборе этой палитры:

— Не используйте влажный бьюти-блендер! Используйте сухой, если хотите использовать губку.-Это основа на восковой основе, вода и воск не смешиваются. — Нет необходимости в грунтовке. Восковые основы прекрасно работают на чистой коже. -Увлажните лицо перед нанесением. -Смешать на тыльной стороне ладони. Тепло расплавит все вместе для приятного применения. — Как только вы закончите манипулировать цветом на лице, закрепите его пудрой, желательно полупрозрачной. Я никогда не была поклонницей закрепления макияжа, но вам нужно использовать восковую основу. В противном случае он скользит, перемещается и стирается.

Надеюсь, это поможет. Раскрашивайте, дамы и господа!

Полезный 4 нашел это полезным.

PYMK в ВК: ОД через EGO-NETS. Возможность добавлять пользователей в друзья есть… | by VK Team

Возможность добавлять пользователей в друзья — одна из важнейших механик любой социальной сети. Подавляющее большинство взаимодействий происходит между пользователями, которые дружат друг с другом. Они видят и комментируют сообщения друг друга в своих новостных лентах и ​​заходят в свои списки друзей, чтобы начать чаты.Вот почему так важен рост социального графа.

Меня зовут Евгений Замятин. Я являюсь частью команды Core ML в ВКонтакте. Хочу рассказать вам о том, как работает наша рекомендательная система, чтобы сблизить пользователей крупнейшей социальной сети рунета.

Современные рекомендательные системы часто состоят из двух уровней, и наша система не исключение.

Первый уровень — поисковая часть системы. Его задача — искать среди всего множества пользователей наиболее релевантных кандидатов.Этот процесс нужно сделать быстро. Обычно эти задачи решаются с помощью простых в использовании моделей, таких как матричные факторизации или эвристики, основанные на количестве общих друзей. Затем кандидаты, полученные на первом уровне, отправляются на второй уровень, где на модель больше не распространяются строгие ограничения скорости. Его основная задача — обеспечить максимальную точность предсказания и создать список, который увидит пользователь. В этой статье мы рассмотрим только первый этап — поиск.

Прежде всего сформулируем постановку задачи.Для каждого пользователя нам нужно найти k кандидатов, которых они с наибольшей вероятностью добавят в друзья. Метрика, на которой мы сосредоточимся, — это отзыв@k. Для этой задачи идеально подходит, так как нас интересует не порядок кандидатов, а важна их релевантность.

Давайте рассмотрим базовые, но до сих пор актуальные решения, придуманные десятки лет назад. Первый метод, который приходит на ум, самый логичный: эвристика, основанная на количестве общих друзей. Для каждого пользователя выбираются кандидаты с наибольшим значением.Этот подход прост в реализации и обеспечивает достойное качество результатов.

Еще одним важным методом рекомендации друзей является Adamic/Adar. Он также основан на анализе общих друзей, хотя и модифицированном: авторы предлагают учитывать количество друзей, которые есть у «общего» друга. Чем больше это значение, тем меньше релевантной информации оно несет.

Недавно наши коллеги из Google+ предложили новый подход к рекомендациям друзей, основанный на эго-сетях. В своей статье авторы предложили кластеризовать эго-сети пользователей.В качестве меры релевантности они использовали значение баллов дружбы , которое представляет собой количество общих друзей в одном кластере эго-сетей.

Помимо методов, основанных на анализе общих друзей, довольно распространены рекомендации на основе встраивания. В Лаборатории искусственного интеллекта ВК МФТИ мы провели исследование, в котором сравнили эффективность разных подходов к задаче предсказания дружбы в ВК. Результаты совпали с нашим опытом.Решения, основанные на встраивании графов, нам не подходят. Помня об этом, мы начали разрабатывать систему отбора кандидатов на основе анализа общих друзей.

Общая схема нашего метода расширяет идеи числа общих друзей и Адамика/Адара. Итоговая мера релевантности E(u, v) , с помощью которой мы будем отбирать кандидатов, также раскладывается на сумму общих друзей u и v . Ключевое отличие заключается в форме слагаемого под суммой.В нашем случае это мера ez_c(u, v) .

Сначала попробуем понять «физический» смысл меры ez_c(u, v) . Представьте, что мы взяли пользователя c и спросили его: «Насколько вероятно, что два ваших друга, и и и , станут друзьями?» Чем больше информации этот пользователь учитывает для своего прогноза, тем точнее он будет. Например, если c может вспомнить только количество своих друзей, его рассуждения могут выглядеть так: «Чем больше у меня друзей, тем меньше вероятность того, что два случайных человека узнают друг друга.Тогда оценка «вероятности» дружбы u и v (с точки зрения c ) может иметь вид 1/log(n) , где n — количество друзей . Вот как работает Адамик/Адар. Но что, если c учитывает больше контекста?

Прежде чем ответить на этот вопрос, давайте разберемся, почему ez_c(u, v) важно определить через пользователя c . Дело в том, что в таком виде очень удобно решать задачу распределённо.Представьте, что мы разослали всем пользователям платформы анкету с просьбой оценить вероятность того, что каждая пара их друзей дружит друг с другом. Получив все ответы, мы можем подставить значения в формулу E(u, v) . Вот как выглядит вычисление E(u, v) с помощью MapReduce:

  • Подготовка . Для каждого c выделяется контекст, который он будет учитывать для выставления оценок.Например, в Adamic/Adar это будет просто список друзей.
  • Карта . «Спросите» каждого c , что они думают о возможности дружбы для каждой пары своих друзей. Мы вычисляем ez_c(u, v) и сохраняем его как (u, v) ez_c(u, v) для всех u , v в N(c) . В случае Адамика/Адара: (u, v) 1 / log|N(c)| .
  • Уменьшить .Для каждой пары (u, v) суммируем все соответствующие значения. Их будет ровно столько, сколько общих друзей у и и и .

Таким образом, мы получаем все ненулевые значения E(u, v) . Примечание: необходимым условием для E(u, v) > 0 является наличие хотя бы одного общего друга u и v .

Контекст пользователя c в случае меры ez_c будет тот же список друзей, но дополненный информацией об отношениях внутри этого списка.Научный термин для такой структуры — «эго-сеть». Более формально, эго-сеть вершины x — это подграф исходного графа, все вершины которого являются соседями x и самого x , а ребра — все ребра исходного графа между этими вершинами. .

Основная идея показателя ez_c заключается в том, что его можно сделать обучаемым. Для каждого пользователя с , его эго-сети и всех пар пользователей u, v внутри нее мы можем насчитать множество различных признаков.Например:

  • Количество взаимных друзей U и V внутри эго-графики C
  • Количество взаимных друзей U и C
  • C
  • Интенсивность взаимодействия между V и C
  • время, прошедшее с момента последней дружбы между вами и кем-то из эго-графа c
  • плотность эго-графа c
  • и другие

Таким образом, мы получим набор данных с признаками.Но нам также нужны метки для обучения. Рассмотрим набор данных, построенный из состояния графа в момент времени T . Тогда в качестве положительных примеров возьмем те пары пользователей, которые не были друзьями на момент T , но стали друзьями на T + △T . И как минус, все остальные пары пользователей, которые не являются друзьями. Примечание: поскольку мы решаем задачу прогнозирования новых дружеских отношений, те пары пользователей, которые уже являются друзьями в момент времени T , не нужно учитывать ни в обучении, ни на практике.

В итоге получаем следующий набор данных:

  • для каждой пары пользователей u и v , а так же их общий друг c , характеристики рассчитываются внутри эго-сети c
  • пара пользователей u и v встречается в наборе данных ровно столько раз, сколько у них есть общих друзей
  • все пары пользователей в наборе данных не являются друзьями в данный момент времени T
  • для каждой пары u и v метка равна 1, если они стали друзьями в течение времени △T , начиная с T , и 0 иначе

Мы будем использовать этот набор данных для обучения нашей меры ez_c .В качестве модели мы выбрали градиентный бустинг с функцией попарных потерь, где ID группы — user u .

По сути, мера ez_c (u, v) определяется как предсказание модели, описанной выше. Но есть один нюанс: при парном обучении распределение предсказаний модели похоже на нормальное. Следовательно, если мы возьмем «сырой» прогноз в качестве определения меры ez_c(u, v) , у нас может возникнуть ситуация, когда мы оштрафуем окончательную меру E(u, v) для общих друзей, поскольку значения прогнозов отрицательные.Это не совсем понятно, так как мы не хотим, чтобы мера E(u, v) уменьшалась с увеличением числа общих друзей. Итак, в дополнение к предсказанию модели мы решили взять показатель степени:

. Этот подход хорошо работает на небольших графиках. Но чтобы применить его к реальным данным, нам нужно выполнить еще одно действие. Суть проблемы такова: мы не можем рассчитать признаки и применить модель для каждой пары пользователей всех эго-сетей, так как это заняло бы слишком много времени. Чтобы решить эту проблему, мы придумали специальный трюк.Представим, что наш градиентный бустинг обучен таким образом, что каждое дерево использует атрибуты только одного пользователя: либо u , либо v . Тогда мы могли бы разделить весь ансамбль на две группы: к группе A мы бы отнесли деревья, которые используют только атрибуты пользователя u , к B , пользователя v . Предсказание такой модели может быть представлено как:

С помощью такой модели мы могли бы быстрее получать предсказания для всех пар пользователей одной и той же эго-сети.Все, что нам нужно сделать, это применить модели A и B для каждого пользователя, а затем сложить прогнозы, соответствующие парам. Таким образом, для эго-сети из n вершин мы могли бы уменьшить количество применений модели с O(n²) до O(n) .

Но как получить модель, в которой каждое дерево зависит только от одного пользователя? Вот как:

  1. Исключите из набора данных все признаки, которые одновременно зависят как от u , так и от v . Например, атрибут «количество общих друзей по и по внутри эго-графа с» придется удалить.
  2. Модель поезда A , использующая только функции, основанные на u , c и ego-net c .
  3. Для обучения модели B оставьте только признаки, основанные на v , c и ego-net c . Передайте прогнозы модели A в качестве базовых прогнозов.

Если мы объединим модели A и B , мы получим то, что нам нужно: первая часть использует особенности u , вторая использует особенности v .Набор моделей имеет смысл, потому что B был обучен «исправлять» предсказания A . Такая оптимизация позволяет ускорить расчеты в сотни раз и делает подход применимым на практике. Окончательный результат ez_c(u, v) и E(u, v) выглядит следующим образом:

Обратите внимание, что E(u, v) можно представить как:

Эта формула является скалярным произведением разреженных векторов, индексы которых являются пользователями, а значения — показателями прогнозов модели.Ненулевые значения здесь только для друзей и — по сути, это просто списки друзей с дополнительными значениями.

При построении рекомендаций мы уже рассчитали прогнозы модели для всех существующих дружеских отношений. Поэтому для каждого пользователя мы можем собрать векторы и поместить их в доступное онлайн-хранилище ключей-значений. После этого мы можем получить значение E(u, v) для любой пары онлайн-пользователей с помощью простой операции умножения векторов. Это позволяет использовать E(u, v) в качестве легкой функции релевантности в высоконагруженных частях системы или в качестве дополнительного признака итоговой модели ранжирования.

В результате система EGOML позволяет:

  1. Подбирать кандидатов для каждого пользователя офлайн в распределенных настройках. Асимптотическая сложность оптимизированного алгоритма составляет O(|E|) вычислений признаков и модельных приложений, где |E| — количество подключений в графе.
  2. Быстро рассчитайте меру релевантности E(u, v) для любой пары пользователей онлайн. Асимптотическая сложность операции составляет O(|N(u)| + |N(v)|) .
  3. Улучшить качество рекомендаций, расширив количество учитываемых графов (друзья, скрытые рекомендации, отправленные сообщения и другие графы) и добавив к ребрам и вершинам различные метки, такие как интенсивность взаимодействий на ребре, дата формирование края, город пользователя или место его работы или учебы.

В ВК мы перешли от метода отбора кандидатов Адамика/Адара к системе EGOML и ввели в модель признаки, основанные на мере E(u, v) .Это позволило нам увеличить количество подтвержденных френдов на всей платформе на несколько десятков процентов.

Я хотел бы поблагодарить руководителя команды Core ML Андрея Якушева за помощь в разработке этого метода и подготовке этой статьи, а также всю команду Core ML за поддержку на различных этапах этой работы.

Родился слишком рано: уход за недоношенным ребенком | Reproductive Health

  • Blencowe H, Cousens S, Oestergaard MZ, Chou D, Moller AB, Narwal R, Adler A, Vera Garcia C, Rohde S, Say L, Lawn JE: национальные, региональные и мировые оценки частоты преждевременных родов в 2010 году с временными тенденциями с 1990 года для отдельных стран: систематический анализ и последствия.Ланцет. 2012, 379: 2162-2172. 10.1016/S0140-6736(12)60820-4.

    ПабМед Google ученый

  • Лоун Дж. Э., Кинни М. В., Белизан Дж. М., Мейсон Э. М., Макдугалл Л., Ларсон Дж., Лакриц Э., Фриберг И. К., Хаусон К. П.: Рожденные слишком рано: Ускорение действий по профилактике и уходу за 15 миллионами новорожденных, рожденных слишком рано. Воспроизведение здоровья. 2013, 10 (Прил. 1): S6-10.1186/1742-4755-10-S1-S6.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Howson CP, Kimmey MV, McDougall L, Lawn JE: Рожденные слишком рано: Преждевременные роды имеют значение.Воспроизведение здоровья. 2013, 10 (Прил. 1): S1-10.1186/1742-4755-10-S1-S1.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Blencowe H, Cousens S, Chou D, Oestergaard M, Say L, Moller AB, Kinney M, Lawn J: Рожденные слишком рано: глобальная эпидемиология 15 миллионов преждевременных родов. Воспроизведение здоровья. 2013, 10 (Прил. 1): S2-10.1186/1742-4755-10-S1-S2.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Дин С.В., Мейсон Э.М., Хаусон С.П., Ласси З.С., Имам А.М., Бхутта З.А. Рожденные слишком рано: уход до и между беременностями для предотвращения преждевременных родов: от доказательств к действиям.Воспроизведение здоровья. 2013, 10 (Прил. 1): S3-10.1186/1742-4755-10-S1-S3.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Рекехо Дж., Альтабе Ф., Мериальди М., Келлер К., Кац Дж., Менон Р. Рожденные слишком рано: Уход во время беременности и родов для сокращения числа преждевременных родов и улучшения состояния здоровья недоношенного ребенка. Воспроизведение здоровья. 2013, 10 (Прил. 1): S4-10.1186/1742-4755-10-S1-S4.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Петру С., Хендерсон Дж., Брейсвелл М., Хокли С., Уолке Д., Марлоу Н.: Раздвигая границы жизнеспособности: экономические последствия экстремальных преждевременных родов.Ранний Хам Дев. 2006, 82: 77-84. 10.1016/j.earlhumdev.2006.01.002.

    ПабМед Google ученый

  • Liu L, Johnson HL, Cousens S, Perin J, Scott S, Lawn JE, Rudan I, Campbell H, Cibulskis R, Li M: Глобальные, региональные и национальные причины детской смертности: обновленный систематический анализ 2010 г. с временными тенденциями с 2000 г. Lancet. 2012, 379: 2151-2161. 10.1016/S0140-6736(12)60560-1.

    ПабМед Google ученый

  • Blencowe H, Lee AC, Cousens S, Bahalim A, Narwal R, Zhong N, Chou D, Say L, Modi N, Katz J: Оценки нарушений здоровья, связанных с преждевременными родами, на региональном и глобальном уровне за 2010 год.Педиатрические исследования. представлено

  • Behrman RE, Butler AS: Преждевременные роды: причины, последствия и профилактика. Комитет по пониманию преждевременных родов и обеспечению здоровых исходов BoHSP ed. 2006, Вашингтон, округ Колумбия: The National Academys Press

    Google ученый

  • Марлоу Н., Волке Д., Брейсвелл М.А., Самара М.: Неврологическая инвалидность и нарушение развития в шестилетнем возрасте после чрезвычайно преждевременных родов. N Engl J Med.2005, 352: 9-19. 10.1056/NEJMoa041367.

    КАС пабмед Google ученый

  • Осрин Д. Влияние поздних преждевременных родов на глобальное выживание детей. Международный журнал эпидемиологии. 2010, 39: 645-649. 10.1093/ije/dyq096.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Шапиро-Мендоза К.К., Лакриц Э.М.: Эпидемиология поздних и умеренных преждевременных родов.Semin Fetal Neonatal Med. 2012

    Google ученый

  • Влияние антенатальных стероидов на созревание плода на перинатальные исходы — промежуточный проект заявления. Заявление о согласии NIH онлайн. 1994, 12: 1-24.

  • Mwansa-Kambafwile J, Cousens S, Hansen T, Lawn JE: Антенатальные стероиды при преждевременных родах для предотвращения неонатальной смертности из-за осложнений преждевременных родов. Int J Эпидемиол. 2010, 39 (Приложение 1): i122-133.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Roberts D, Dalziel S: Антенатальные кортикостероиды для ускорения созревания легких плода у женщин с риском преждевременных родов. Кокрановская база данных систематических обзоров. 2006, 3: CD004454-

    PubMed Google ученый

  • Althabe F, Belizan JM, Mazzoni A, Berrueta M, Hemingway-Foday J, KosoThomas M, McClure E, Chomba E, Garces A, Goudar S: Испытание антенатальных кортикостероидов при преждевременных родах для повышения выживаемости новорожденных в развивающихся странах: протокол исследования.Воспроизведение здоровья. 2012, 9: 22-10.1186/1742-4755-9-22.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Де Паоли А.Г., Морли С., Дэвис П.Г.: Назальный СИПАП для новорожденных: что мы знаем в 2003 году?. Архив болезней в детском возрасте Издание плода и новорожденного. 2003, 88: F168-172. 10.1136/фн.88.3.F168.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Сола А., Сальдено Ю.П., Фаварето В.: Клиническая практика неонатальной оксигенации: где мы потерпели неудачу? Что мы можем сделать?.Журнал перинатологии: официальный журнал Калифорнийской перинатальной ассоциации. 2008, С28-34. 28 Suppl 1

  • Symington A, Pinelli J: Уход за развитием для содействия развитию и предотвращения заболеваемости у недоношенных детей. Кокрановская база данных систематических обзоров. 2003, CD001814-

    Google ученый

  • Lawn JE, Yakoob MY, Haws RA, Soomro T, Darmstadt GL, Bhutta ZA: 3,2 миллиона мертворождений: эпидемиология и обзор обзора доказательств.BMC Беременность Роды. 2009, 9 (Приложение 1): S2-10.1186/1471-2393-9-S1-S2.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Mwaniki MK, Atieno M, Lawn JE, Newton CR: Долгосрочные исходы развития нервной системы после внутриутробных и неонатальных инсультов: систематический обзор. Ланцет. 2012, 379: 445-452. 10.1016/S0140-6736(11)61577-8.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Gilbert C, Rahi J, Eckstein M, O’Sullivan J, Foster A: Ретинопатия недоношенных в странах со средним уровнем дохода.Ланцет. 1997, 350: 12-14. 10.1016/С0140-6736(97)01107-0.

    КАС пабмед Google ученый

  • Gilbert C: Ретинопатия недоношенных: глобальная перспектива эпидемий, популяция младенцев, подверженных риску, и последствия для контроля. Ранний Хам Дев. 2008, 84: 77-82. 10.1016/j.earlhumdev.2007.11.009.

    ПабМед Google ученый

  • PMNCH: Глобальный обзор ключевых вмешательств, связанных с репродуктивным здоровьем, здоровьем матерей, новорожденных и детей (RMNCH).2011, Женева, Швейцария: Партнерство по охране здоровья матерей, новорожденных и детей

    Google ученый

  • ВОЗ: Учебный курс по основам ухода за новорожденными. 2010, >Женева: Всемирная организация здравоохранения

    Google ученый

  • McCall EM, Alderdice FA, Halliday HL, Jenkins JG, Vohra S: Мероприятия по предотвращению гипотермии при рождении у недоношенных детей и/или детей с низкой массой тела при рождении.Cochrane Database Syst Rev. 2005, CD004210-

    Google ученый

  • Для кого: Тепловая защита новорожденных: Практическое руководство. Женева: ВОЗ. 1997

    Google ученый

  • Пенни-МакГилливрей Т: Первое купание новорожденного: когда?. J Obstet Gynecol Neonatal Nurs. 1996, 25: 481-487. 10.1111/j.1552-6909.1996.tb01468.x.

    КАС пабмед Google ученый

  • Думан Н., Уткутан С., Кумрал А., Короглу Т.Ф., Озкан Х.: Обертывание кожи полиэтиленом ускоряет восстановление после гипотермии у младенцев с очень низкой массой тела при рождении.Педиатр Междунар. 2006, 48: 29-32. 10.1111/j.1442-200X.2006.02155.x.

    ПабМед Google ученый

  • Greer FR: Кормление недоношенных детей в 20 веке. Журнал питания. 2001, 131: 426С-430С.

    КАС пабмед Google ученый

  • Бхутта З.А., Ахмед Т., Блэк Р.Э., Кусенс С., Дьюи К., Джуглиани Э., Хайдер Б.А., Кирквуд Б., Моррис С.С., Сачдев Х.П., Шекар М.: Что работает? Вмешательства в отношении недоедания и выживания матерей и детей.Ланцет. 2008, 371: 417-440. 10.1016/S0140-6736(07)61693-6.

    ПабМед Google ученый

  • Edmond KM, Zandoh C, Quigley MA, menga-Etego S, Owusu-Agyei S, Kirkwood BR: Отсроченное начало грудного вскармливания увеличивает риск неонатальной смертности. Педиатрия. 2006, 117: e380-e386. 10.1542/пед.2005-1496.

    ПабМед Google ученый

  • Mullany LC, Katz J, Li YM, Khatry SK, LeClerq SC, Darmstadt GL, Tielsch JM: Модели грудного вскармливания, время до начала и риск смертности среди новорожденных на юге Непала.Журнал питания. 2008, 138: 599-603.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Callen J, Pinelli J: Обзор литературы, посвященной преимуществам и проблемам, распространенности и продолжительности, а также препятствиям для грудного вскармливания у недоношенных детей. Adv Неонатальный уход. 2005, 5: 72-88. 10.1016/j.adnc.2004.12.003. викторина 89-92

    PubMed Google ученый

  • Эдмонд К.М., Кирквуд Б.Р., Аменга-Этего С., Овусу-Агьеи С., Хёрт Л.С.: Влияние практики раннего вскармливания младенцев на инфекционно-специфическую неонатальную смертность: исследование причинно-следственных связей с данными наблюдений в сельских районах Ганы.Am J Clin Nutr. 2007, 86: 1126-1131.

    КАС пабмед Google ученый

  • Hurst NM: 3 М грудного вскармливания недоношенного ребенка. J Перинат Неонатальные медсестры. 2007, 21: 234-239. 10.1097/01.JPN.0000285813.59269.6е. викторина 240-231

    PubMed Google ученый

  • ВОЗ: Руководство по оптимальному кормлению детей с низкой массой тела при рождении в странах с низким и средним уровнем дохода.2011, Женева: Всемирная организация здравоохранения

    Google ученый

  • Lawn JE, McCarthy BJ, Ross SR: Здоровый новорожденный: Справочное руководство для руководителей программ. 2001, CDC и CARE, Атланта, Джорджия

    Google ученый

  • ВОЗ, ЮНФПА, ЮНИСЕФ, Группа Всемирного банка: Решение проблем новорожденных: руководство для врачей, медсестер и акушерок. 2003 г., Женева: Всемирная организация здравоохранения

    . Google ученый

  • ВОЗ: Рекомендации по ведению распространенных заболеваний детского возраста: фактические данные для технического обновления рекомендаций карманного справочника.2012, Женева: Всемирная организация здравоохранения

    Google ученый

  • Blencowe H, Cousens S, Mullany LC, Lee AC, Kerber K, Wall S, Darmstadt GL, Lawn JE: Чистые методы родовспоможения и послеродового ухода для снижения неонатальной смертности от сепсиса и столбняка: систематический обзор и оценка Delphi эффект смертности. Общественное здравоохранение BMC. 2011, 11 (Приложение 3): S11-10.1186/1471-2458-11-S3-S11.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Сьюард Н., Осрин Д., Ли Л., Костелло А., Пулкки-Браннстром А.М., Хаувелинг Т.А., Моррисон Дж., Наир Н., Трипати П., Азад К. Связь между использованием чистых родовспоможений, методами чистых родов и выживанием новорожденных : Объединенный анализ данных из трех мест в Южной Азии.ПЛОС лекарство. 2012, 9: e1001180-10.1371/journal.pmed.1001180.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Прост А., Колборн Т., Сьюард Н., Азад К., Кумарасами А., Копас А., Хаувелинг Т.А., Фоттрелл Э., Куддус А., Левицка С.: Женские группы, практикующие совместное обучение и деятельность по улучшению здоровья матерей и новорожденных в странах с низким настройки ресурсов: систематический обзор и метаанализ. Ланцет. 2013, 381: 1736-1746. 10.1016/S0140-6736(13)60685-6.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Arifeen SE, Mullany LC, Shah R, Mannan I, Rahman SM, Talukder MR, Begum N, Al-Kabir A, Darmstadt GL, Santosham M: Влияние очистки пуповины хлоргексидином на неонатальную смертность в сельских районах Бангладеш: групповое рандомизированное исследование на базе сообщества. Ланцет. 2012, 379: 1022-1028. 10.1016/S0140-6736(11)61848-5.

    ПабМед Google ученый

  • Soofi S, Cousens S, Imdad A, Bhutto N, Ali N, Bhutta ZA: Местное применение хлоргексидина к пуповине новорожденных для профилактики омфалита и неонатальной смертности в сельском районе Пакистана: кластер на уровне сообщества — рандомизированное испытание.Ланцет. 2012, 379: 1029-1036. 10.1016/S0140-6736(11)61877-1.

    КАС пабмед Google ученый

  • Tielsch JM, Darmstadt GL, Mullany LC, Khatry SK, Katz J, LeClerq SC, Shrestha S, Adhikari R: Влияние очистки кожи новорожденных хлоргексидином на неонатальную смертность в южном Непале: групповое исследование рандомизированное исследование. Педиатрия. 2007, 119: e330-340. 10.1542/пед.2006-1192.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Soll RF, Edwards WH: Смягчающая мазь для профилактики инфекций у недоношенных детей.Кокрановская база данных систематических обзоров. 2000, CD001150-

    Google ученый

  • Дармштадт Г.Л., Бадрави Н., Лоу П.А., Ахмед С., Башир М., Искандер И., Аль Саид Д., Эль Холи А., Хусейн М.Х., Алам А.: Подсолнечное масло для местного применения предотвращает инвазивные бактериальные инфекции у недоношенных детей в Египте : рандомизированное контролируемое клиническое исследование. Pediatr Infect Dis J. 2004, 23: 719-725. 10.1097/01.инф.0000133047.50836.6ф. 719-725

    ПабМед Google ученый

  • Дармштадт Г.Л., Саха С.К., Ахмед А.С., Чой Ю., Чоудхури М.А., Ислам М., Лоу П.А., Ахмед С.: Влияние местного смягчающего лечения недоношенных новорожденных в Бангладеш на инвазию патогенов в кровоток.Педиатр рез. 2007, 61: 588-593. 10.1203/pdr.0b013e3180459f75.

    КАС пабмед Google ученый

  • Даффи Дж.Л., Фергюсон Р.М., Дармштадт Г.Л.: Возможности для улучшения, адаптации и внедрения смягчающей терапии и усовершенствованных методов ухода за кожей новорожденных в Африке. J Trop Педиатр. 2011

    Google ученый

  • McDonald SJ, Middleton P: Влияние времени пережатия пуповины у доношенных детей на материнские и неонатальные исходы.Кокрановская база данных систематических обзоров. 2008, CD004074-

    Google ученый

  • Leduc D, Senikas V, Lalonde AB, Ballerman C, Biringer A, Delaney M, Duperron L, Girard I, Jones D, Lee LS: Активное ведение третьего периода родов: профилактика и лечение послеродового кровотечения. Журнал акушерства и гинекологии Канады: JOGC = Журнал акушерства и гинекологии Канады: JOGC. 2009, 31: 980-993.

    ПабМед Google ученый

  • Wall SN, Lee AC, Niermeyer S, English M, Keenan WJ, Carlo W, Bhutta ZA, Bang A, Narayanan I, Ariawan I, Lawn JE: Реанимация новорожденных в условиях ограниченных ресурсов: что, кто и как преодолеть проблемы, чтобы масштабироваться?.Int J Gynaecol Obstet. 2009, 107 (Приложение 1): S47-62. S63-44

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Saugstad OD, Ramji S, Vento M: Кислород для реанимации новорожденных: сколько достаточно?. Педиатрия. 2006, 118: 789-792. 10.1542/пед.2006-0832.

    ПабМед Google ученый

  • Lee AC, Cousens S, Wall SN, Niermeyer S, Darmstadt GL, Carlo WA, Keenan WJ, Bhutta ZA, Gill C, Lawn JE: Неонатальная реанимация и неотложная оценка и стимуляция новорожденных для предотвращения неонатальной смертности: a систематический обзор, метаанализ и оценка эффекта смертности по методу Дельфи.Общественное здравоохранение BMC. 2011, 11 (Приложение 3): S12-10.1186/1471-2458-11-S3-S12.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • ВОЗ: Базовая реанимация новорожденных: практическое руководство. 1997, Женева: Всемирная организация здравоохранения

    Google ученый

  • Каттвинкель Дж., Перлман Дж.М., Азиз К., Колби С., Фэйрчайлд К., Галлахер Дж., Хазински М.Ф., Халамек Л.П., Кумар П., Литтл Г.: Реанимация новорожденных: Руководство Американской кардиологической ассоциации 2010 г. по сердечно-легочной реанимации и неотложной сердечно-сосудистой помощи.Педиатрия. 2010, 126: e1400-1413. 10.1542/пед.2010-2972Э.

    ПабМед Google ученый

  • Сингхал Н., Локьер Дж., Фидлер Х., Кинан В., Литтл Г., Бухер С., Кадир М., Нирмейер С.: Помощь младенцам дышать: разработка глобальной программы реанимации новорожденных и формирующая образовательная оценка. Реанимация. 2012, 83: 90-96. 10.1016/ж.реанимация.2011.07.010.

    ПабМед Google ученый

  • Карло В.А., Гудар С.С., Джехан И., Чомба Э., Цефу А., Гарсес А., Парида С., Алтабе Ф., МакКлюр Э.М., Дерман Р.Дж.: Обучение уходу за новорожденными и перинатальная смертность в развивающихся странах.N Engl J Med. 2010, 362: 614-623. 10.1056/NEJMsa0806033.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Карло В.А., Гудар С.С., Джехан И., Чомба Э., Цефу А., Гарсес А., Парида С., Алтабе Ф., МакКлюр Э.М., Дерман Р.Дж.: Высокий уровень смертности среди младенцев с очень низкой массой тела при рождении в развивающихся странах, несмотря на обучение. Педиатрия. 2010, 126: e1072-1080. 10.1542/пед.2010-1183.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Чарпак Н., Руис Дж.Г., Зупан Дж., Каттанео А., Фигероа З., Тессье Р., Кристо М., Андерсон Г., Лудингтон С., Мендоса С.: Забота о матери-кенгуру: 25 лет спустя.Акта Педиатр. 2005, 94: 514-522. 10.1080/08035250510027381.

    ПабМед Google ученый

  • Рей Э., Мартинес Х.: Манехио racional del Nino Prematuro. Медицина плода. 1983, Богота, Колумбия: Национальный университет, Cursode

    Google ученый

  • Lawn JE, Mwansa-Kambafwile J, Horta BL, Barros FC, Cousens S: «Уход за матерью по методу кенгуру» для предотвращения неонатальной смертности из-за осложнений при преждевременных родах.Внутренний журнал эпидемиологии. 2010, i1-i10.

    Google ученый

  • Conde-Agudelo A, Belizan JM, Diaz-Rossello J: Методы кенгуру для снижения заболеваемости и смертности детей с низким весом при рождении. Кокрановская база данных систематических обзоров. 2011, 3: CD002771-

    PubMed Google ученый

  • Lima G, Quintero-Romero S, Cattaneo A: Осуществимость, приемлемость и стоимость программы кенгуру в Ресифи, Бразилия.Энн Троп Педиатр. 2000, 20: 22-26. 10.1080/02724930092020.

    КАС пабмед Google ученый

  • Для кого: Кенгуру: практическое руководство. 2003 г., Женева: ВОЗ

    Google ученый

  • ВОЗ: Справочник ИВБДВ: комплексное ведение детских болезней. 2005 г., Женева: Всемирная организация здравоохранения

    . Google ученый

  • ВОЗ: Карманный справочник стационарной помощи детям: Руководство по ведению распространенных заболеваний при ограниченных ресурсах.2007 г., Женева: Всемирная организация здравоохранения

    . Google ученый

  • Исследовательская группа по клиническим признакам у младенцев раннего возраста: Клинические признаки, предсказывающие тяжелое заболевание у детей в возрасте до 2 месяцев: многоцентровое исследование. Ланцет. 2008, 371: 135-142.

    Google ученый

  • Duke T, Subhi R, Peel D, Frey B: Пульсоксиметрия: технология снижения детской смертности в развивающихся странах.Анналы тропической педиатрии. 2009, 29: 165-175. 10.1179/027249309X124679941.

    КАС пабмед Google ученый

  • Санкар М.Дж., Санкар Дж., Агарвал Р., Пол В.К., Деорари А.К.: Протокол для введения постоянного положительного давления в дыхательных путях у новорожденных. Индийский журнал педиатрии. 2008, 75: 471-478. 10.1007/s12098-008-0074-х.

    ПабМед Google ученый

  • Finer NN, Carlo WA, Walsh MC, Rich W, Gantz MG, Laptook AR, Yoder BA, Faix RG, Das A, Poole WK: Ранний CPAP по сравнению с сурфактантом у крайне недоношенных детей.N Engl J Med. 2010, 362: 1970-1979.

    КАС пабмед Google ученый

  • Gittermann MK, Fusch C, Gittermann AR, Regazzoni BM, Moessinger AC: Ранняя назальная терапия постоянным положительным давлением в дыхательных путях снижает потребность в интубации новорожденных с очень низкой массой тела при рождении. Eur J Педиатр. 1997, 156: 384-388. 10.1007/s004310050620.

    КАС пабмед Google ученый

  • Morley CJ, Davis PG, Doyle LW, Brion LP, Hascoet JM, Carlin JB: Назальный СИПАП или интубация при рождении для глубоко недоношенных детей.N Engl J Med. 2008, 358: 700-708. 10.1056/NEJMoa072788.

    КАС пабмед Google ученый

  • Pieper CH, Smith J, Maree D, Pohl FC: полезен ли nCPAP для крайне недоношенных детей, не имеющих доступа к интенсивной терапии новорожденных?. J Trop Педиатр. 2003, 49: 148-152. 10.1093/тропей/49.3.148.

    КАС пабмед Google ученый

  • Браун Дж., Мачен Х., Каваза К., Мванза З., Инигез С., Ланг Х., Гест А., Кеннеди Н., Мирос Р., Ричардс-Кортум Р.: Высококачественная недорогая пузырьковая система непрерывного положительного давления в дыхательных путях для условий с ограниченными ресурсами: техническая оценка и первоначальные отчеты о случаях.ПЛОС Один. 2013, 8: e53622-10.1371/journal.pone.0053622.

    Центральный пабмед КАС пабмед Google ученый

  • Kawaza K, Machen H, Brown J, Mwanza Z, Iniguez S, Gest A, Smith O, Oden M, Richards-Kortum R, Molyneux E: Эффективность недорогой пузырьковой системы CPAP при лечении дыхательной недостаточности в неонатальном отделении в Малави. 2013, (подано)

    Google ученый

  • Rice 360° предлагает пузырьковый CPAP для помощи младенцам с респираторными заболеваниями в Африке.[http://bioengineering.rice.edu/Content.aspx?id=2147483870]

  • Segre J: Анализ продукта для CPAP. Отчет в Фонд Билла и Мелинды Гейтс. 2012

    Google ученый

  • ВОЗ: Перечень ВОЗ основных лекарственных средств для детей, 3-е издание. 2011, Женева: Всемирная организация здравоохранения

    Google ученый

  • Видьясагар Д., Велафи С., Бхат В.Б.: Заместительная терапия сурфактантом в развивающихся странах.Неонатология. 2011, 99: 355-366. 10.1159/000326628.

    КАС пабмед Google ученый

  • Бхутта З., Якуб М., Салам Р., Ласси З.: Глобальный обзор вмешательств, связанных со здоровьем матерей, новорожденных и детей (ЗМНД): что работает и что можно расширить?. 2011, Пакистан: Университет Ага Хана

    Google ученый

  • ЮНИСЕФ: Положение детей в мире, 2012 г. 2012 г., Нью-Йорк: ЮНИСЕФ

    Google ученый

  • Ласси З.С., Хайдер Б.А., Бхутта З.А. Пакеты вмешательств на уровне сообщества для снижения материнской и неонатальной заболеваемости и смертности и улучшения неонатальных исходов.Кокрановская база данных систематических обзоров. 2010, 11:

    Google ученый

  • Манандхар Д.С., Осрин Д., Шреста Б.П., Меско Н., Моррисон Дж., Тумбахангфе К.М., Таманг С., Тапа С., Шреста Д., Тапа Б.: Влияние совместного вмешательства с женскими группами на исход родов в Непале: кластер- рандомизированное контролируемое исследование. Ланцет. 2004, 364: 970-979. 10.1016/S0140-6736(04)17021-9.

    ПабМед Google ученый

  • ВОЗ, ЮНИСЕФ, USAID, Children St: Совместное заявление ВОЗ-ЮНИСЕФ о посещении новорожденных на дому: стратегия улучшения выживания.2009 г., Женева: Всемирная организация здравоохранения

    . Google ученый

  • Комиссия по информации и подотчетности: Выполнение обещаний, измерение результатов: Комиссия по информации и подотчетности в отношении здоровья женщин и детей. 2011, Женева: Всемирная организация здравоохранения

    Google ученый

  • Обратный отсчет до 2015 года: Ответственность за выживание матерей, новорожденных и детей.Обновленная информация о прогрессе в приоритетных странах. [http://www.countdown2015mnch.org/]

  • Маршан Т., Джарибу Дж., Пенфолд С., Таннер М., Армстронг Шелленберг Дж.: Измерение длины стопы новорожденного для выявления маленьких детей, нуждающихся в дополнительной помощи: поперечное сечение больницы основанное на исследовании с последующим наблюдением сообщества в Танзании. Общественное здравоохранение BMC. 2010, 10: 624-10.1186/1471-2458-10-624.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Баррос А., Бертольди Г., Брайс Дж., Бурма Т., Виктора К.: Описательная статья о масштабах и закономерностях социально-экономического неравенства в странах обратного отсчета до 2015 года.Ланцет. 2012,

    Google ученый

  • Victora CG, Rubens CE: Глобальный отчет о преждевременных родах и мертворождении (4 из 7): проведение вмешательств. BMC Беременность Роды. 2010, S4-10 Suppl 1

  • Barros AJ, Ronsmans C, Axelson H, Loaiza E, Bertoldi AD, Franca GV, Bryce J, Boerma JT, Victora CG: Справедливость в мероприятиях по охране здоровья матерей, новорожденных и детей в Countdown до 2015 г.: ретроспективный обзор данных опросов из 54 стран.Ланцет. 2012, 379: 1225-1233. 10.1016/S0140-6736(12)60113-5.

    ПабМед Google ученый

  • Pattinson R, Kerber K, Waiswa P, Day LT, Mussell F, Asiruddin SK, Blencowe H, Lawn JE: Аудит перинатальной смертности: подсчет, подотчетность и преодоление трудностей при расширении масштабов в странах с низким и средним уровнем дохода. Int J Gynaecol Obstet. 2009, С113-121. S121-112, 107 Suppl 1

  • Knobel RB, Vohra S, Lehmann CU: Профилактика потери тепла в родильном зале для недоношенных детей: национальный обзор отделений интенсивной терапии новорожденных.Журнал перинатологии: официальный журнал Калифорнийской перинатальной ассоциации. 2005, 25: 514-518. 10.1038/sj.jp.7211344.

    Google ученый

  • Помощь детям в дыхании. [http://www.helpingbabiesbreathe.org/guides.html]

  • Комиссия ООН по жизненно важным товарам для женщин и детей. [http://everywomaneverychild.org/resources/un-commission-on-life-saving-commodities]

  • Нюквист К.Х., Андерсон Г.К., Бергман Н., Каттанео А., Чарпак Н., Даванцо Р., Эвальд У., Лудингтон- Hoe S, Mendoza S, Pallas-Allonso C: Современные достижения и рекомендации.Кенгуру по уходу за матерью: применение в высокотехнологичной среде. Акта педиатрическая. 2010, 99: 812-819. 10.1111/j.1651-2227.2010.01794.х.

    КАС пабмед Google ученый

  • Blencowe H, Kerac M, Molyneux E: Безопасность, эффективность и барьеры для последующего наблюдения с использованием политики «ранней выписки» Kangaroo Care в условиях ограниченных ресурсов. J Trop Педиатр. 2009, 55: 244-248. 10.1093/тропей/fmn116.

    ПабМед Google ученый

  • Нгуах С.Б., Вобил П.Н., Обенг Р., Якубу А., Кербер К.Дж., Лоун Дж.Е., Планге-Руле Г.: Восприятие и практика ухода за матерью по методу кенгуру после выписки из больницы в Кумаси, Гана: продольное исследование.БМК при беременности и родах. 2011, 11: 99-10.1186/1471-2393-11-99.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Берг А.М., Роджерс-Блох К., Пратомо Х., Ухудия У., Поэрномо Сигит Сиди И., Рустина Й., Суради Р., Гипсон Р.: Прогресс во внедрении метода кенгуру в 10 больницах Индонезии. Журнал тропической педиатрии. 2012

    Google ученый

  • Honeyfield ME: Практикующие медсестры неонатального отделения: прошлое, настоящее и будущее.Достижения в неонатальной помощи: официальный журнал Национальной ассоциации неонатальных медсестер. 2009, 9: 125-128. 10.1097/ANC.0b013e3181a8369f.

    Google ученый

  • Knippenberg R, Lawn JE, Darmstadt GL, Begkoyian G, Fogstad H, Walelig N, Paul VK: Систематическое расширение неонатальной помощи в странах. Ланцет. 2005, 365: 1087-1098. 10.1016/С0140-6736(05)71145-4.

    ПабМед Google ученый

  • Опондо К., Нтобури С., Вагай Дж., Вафула Дж., Васунна А., Вере Ф., Вамаэ А., Мигиро С., Ириму Г., Инглиш М. Готовы ли больницы поддерживать выживание новорожденных? — Оценка восьми больниц первого уровня в Кении.Троп Мед Int Health. 2009, 14: 1165-1172. 10.1111/j.1365-3156.2009.02358.х.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Робертсон А., Малан А., Гринфилд Д., Машао Л., Рода Н., Гога А., Кербер К., Лоун Дж.: Карты ухода за новорожденными: Ведение больных и маловесных новорожденных в больнице. 2010 г., Кейптаун, Южная Африка: Спасите детей, Правительство провинции Лимпопо и ЮНИСЕФ

    Google ученый

  • Неоги С.Б., Малхотра С., Зодпей С., Мохан П.: Оценка отделений специального ухода за новорожденными в Индии.J Health Popul Nutr. 2011, 29: 500-509.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Сен А., Махаланабис Д., Сингх А.К., Сом Т.К., Бандйопадхьяй С., Рой С. Помощники новорожденных: инновационный подход к уходу за больными новорожденными в отделении специального ухода районного уровня. Журнал здоровья, населения и питания. 2007, 25: 495-501.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Lawn JE, Rudan I, Rubens C: Четыре миллиона смертей новорожденных: основана ли глобальная программа исследований на фактических данных?.Ранний Хам Дев. 2008, 84: 809-814. 10.1016/j.earlhumdev.2008.09.009.

    ПабМед Google ученый

  • Martines J, Paul VK, Bhutta ZA, Koblinsky M, Soucat A, Walker N, Bahl R, Fogstad H, Costello A: Выживание новорожденных: призыв к действию. Ланцет. 2005, 365: 1189-1197. 10.1016/S0140-6736(05)71882-1.

    ПабМед Google ученый

  • Джордж А., Янг М., Банг А., Чан К.И., Рудан И., Виктора К.Г., Чопра М., Рубенс К.: Определение приоритетов исследований по внедрению для сокращения преждевременных родов и мертворождений на уровне сообщества.ПЛОС лекарство. 2011, 8: e1000380-10.1371/journal.pmed.1000380.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Технология Powerfree Education. [http://www.pet.org.za/]

  • Лоун Дж. Э., Кинни М. В., Блэк Р. Е., Питт К., Казенс С., Кербер К., Корбетт Э., Моран А. С., Моррисси К. С., Остергаард М. З.: Выживание новорожденных : многострановой анализ десятилетия перемен. План политики здравоохранения. 2012, iii6-28. 27 Suppl 3

  • Lawn JE, Davidge R, Paul V, Von Xylander S, De Graft Johnson J, Costello A, Kinney M, Segre J, Molyneux E: Уход за недоношенным ребенком.Рожденные слишком рано: отчет о глобальных действиях в отношении преждевременных родов. Под редакцией: Howson CP, Kinney MV, Lawn JE. 2012, Женева, Швейцария: Всемирная организация здравоохранения

    Google ученый

  • Cousens S, Blencowe H, Stanton C, Chou D, Ahmed S, Steinhardt L, Creanga AA, Tuncalp O, Balsara ZP, Gupta S: национальные, региональные и мировые оценки уровня мертворождаемости в 2009 г. с тенденциями с 1995 г. : систематический анализ. Ланцет. 2011, 377: 1319-1330.10.1016/S0140-6736(10)62310-0.

    ПабМед Google ученый

  • Кинни М.В., Кербер К.Дж., Блэк Р.Е., Коэн Б., Нкрума Ф., Кувадия Х., Нампала П.М., Лоун Дж.Е., Аксельсон Х., Берг А.М.: Матери, новорожденные и дети Африки к югу от Сахары: где и почему они умереть?. ПЛОС Мед. 2010, 7: e1000294-10.1371/journal.pmed.1000294.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • ЮНИСЕФ: Положение детей в мире.2012, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: ЮНИСЕФ

    Google ученый

  • СПИСОК: инструмент для спасения жизней. Основанный на фактических данных инструмент для оценки воздействия вмешательства. [http://www.jhsph.edu/dept/ih/IIP/list/index.html]

  • Смит Г.Ф., Видьясагар Д., Смит П.Н.: Исторический обзор и последние достижения в неонатальной и перинатальной медицине. 1983, Чикаго: Отдел питания Мид Джонсон

    Google ученый

  • NIH: Интенсивная терапия новорожденных: история передового опыта.1985, Бетесда, Мэриленд, США: Национальный институт здравоохранения

    Google ученый

  • Baker JP: Инкубатор и медицинское открытие недоношенного ребенка. Журнал перинатологии: официальный журнал Калифорнийской перинатальной ассоциации. 2000, 20: 321-328. 10.1038/sj.jp.7200377.

    КАС Google ученый

  • Wegman ME: Младенческая смертность в 20 веке, резкий, но неравномерный прогресс.Журнал питания. 2001, 131: 401С-408С.

    КАС пабмед Google ученый

  • Филип А.Г.: Эволюция неонатологии. Педиатрическое исследование. 2005, 58: 799-815. 10.1203/01.ПДР.0000151693.46655.66.

    ПабМед Google ученый

  • Джеймисон Д.Т., Шахид-Саллес С.А., Джеймисон Дж., Лоун Дж., Зупан Дж.: «Включение смертей незадолго до рождения в оценки глобального бремени болезней».2006, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Издательство Оксфордского университета

    Google ученый

  • Lissauer T, Fanaroff AA: Взгляд на неонатологию. 2006, Оксфорд: Wiley-Blackwell

    Google ученый

  • Национальные статистические отчеты о естественном движении населения. [http://www.cdc.gov/nchs/products/nvsr.htm#vol60]

  • Управление национальной статистики, имеющее лицензию Open Government License v.1.0. [http://www.ons.gov.uk/ons/index.html]

  • Партнерство по материнскому NCH: глобальный обзор ключевых вмешательств, связанных с репродуктивным здоровьем, здоровьем матерей, новорожденных и детей (RMNCH). 2011, Женева, Швейцария: PMNCH

    Google ученый

  • Дыхание жизни. [http://www.eastmeetswest.org/Page.aspx?pid=344]

  • Lawn J, Kerber K: Возможности для новорожденных в Африке: практические данные, политика и программная поддержка ухода за новорожденными в Африке.2006 г., Кейптаун: PMNCH, Save the Children, UNFPA, UNICEF, USAID, WHO

    Google ученый

  • Лоун Дж. Э., Кинни М., Ли А. С., Чопра М., Донней Ф., Пол В. К., Бхутта З. А., Бейтман М., Дармштадт Г. Л.: Снижение интранатальной смертности и инвалидности: может ли система здравоохранения обеспечить это?. Int J Gynaecol Obstet. 2009, С123-140. S140-122, 107 Suppl 1

  • Volpe JJ: Черепно-мозговая травма у недоношенных детей: сложная смесь деструктивных нарушений и нарушений развития.Ланцет Нейрол. 2009, 8: 110-124. 10.1016/S1474-4422(08)70294-1.

    Центральный пабмед пабмед Google ученый

  • Schanler RJ: Использование грудного молока для недоношенных детей. Педиатр Клин Норт Ам. 2001, 48: 207-219. 10.1016/S0031-3955(05)70295-9.

    КАС пабмед Google ученый

  • Спасите детей: состояние матерей мира: выжить в первый день.2013, Лондон, Великобритания: Save the Children International

    Google ученый

  • Вставка ДНК путем вырезания и вставки с помощью сконструированных CRISPR-ассоциированных транспозаз типа V-K

    Abstract

    CRISPR-ассоциированные транспозазы (CAST) обеспечивают независимые от рекомбинации вставки ДНК с несколькими тысячами пар оснований в запрограммированных РНК участках генома. CAST типа V-K предлагают явные технологические преимущества по сравнению с CAST типа I, учитывая их меньший размер кода, меньшее количество компонентов и однонаправленные вставки.Однако полезность CAST типа V-K затруднена механизмом репликативной транспозиции, который приводит к смеси желаемых вставок простых грузов и нежелательных продуктов коинтеграции плазмид. Здесь мы преодолеваем это ограничение, разрабатывая новые CAST с значительно улучшенной чистотой продукта. Для этого мы компенсируем отсутствие субъединицы TnsA в множественных CAST типа V-K, разрабатывая интегрирующий комплекс CAST с большой последовательностью с помощью самонаводящейся эндонуклеазы или систему HELIX. HELIX использует самонаводящуюся эндонуклеазу (nHE), слитую с TnsB, для восстановления 5-дюймовой способности к надрезу, необходимой для двойного разрыва донора ДНК.Используя отличительные особенности систем как типа V-K, так и типа I, HELIX позволяет выполнять вставку ДНК методом вырезания и вставки с чистотой продукта простой вставки до 99,3%, сохраняя при этом высокую эффективность интеграции на геномных мишенях. Кроме того, мы демонстрируем универсальность этого подхода, создавая системы HELIX для других ортологов CAST. Мы также устанавливаем возможность создания минимальной 3-компонентной HELIX, упрощая количество белков, которые должны быть экспрессированы. Вместе HELIX оптимизирует и улучшает применение технологий транспозиции на основе CRISPR, устраняя барьеры для эффективных и специфических вставок ДНК, управляемых РНК.

    Основной

    Программируемая вставка многокилопарных последовательностей ДНК в геномы без использования гомологичной рекомбинации и двухцепочечных разрывов (DSB) открывает новые возможности для точного редактирования генома. Методы геномной интеграции обычно основаны на вирусных векторах 1,2 или транспозонах 3-7 , оба из которых лишены программируемости и, таким образом, стохастически встраиваются в геном, или нуклеазах, связанных с донорами ДНК 8-10 , которые основаны на цитотоксичности. DSB и механизм гомологичной рекомбинации хозяина.Кроме того, системы рекомбинации в бактериях имеют низкую эффективность 11 без коинтеграции селективного маркера 12 или контрселекции CRISPR-Cas 13 . CRISPR-ассоциированные транспозазы (CAST) представляют собой многообещающий новый подход к программируемым, независимым от рекомбинации вставкам ДНК посредством взаимодействия между механизмом транспозазы и эффектором(ами) CRISPR для прямого РНК-управляемого переноса 14-16 .

    Два основных класса CAST, типы I и V-K, обладают различными и взаимодополняющими свойствами.В то время как охарактеризованные CAST типа I демонстрируют высокую специфичность к мишени и, как правило, приводят только к предполагаемым продуктам простого гена вставки 17 (хотя и с исключениями 18 ), большее количество генов Cas, стехиометрическая сложность и размер кодирования могут ограничивать дальнейшие процессы. развитие инструмента в других организмах, таких как эукариотические клетки. Кроме того, склонность некоторых систем типа I к двунаправленным вставкам приводит к нежелательным примесям редактирования 15 ( Рис.1а ). Для сравнения, CAST типа V-K более компактны с точки зрения размера кода, содержат только четыре основных компонента и обеспечивают полную или почти полную однонаправленную вставку. Однако CAST типа VK приводят к проблематичной смеси продуктов простой вставки и коинтеграции генов, последняя из которых состоит из дупликации груза и полной вставки остова плазмиды 4,6 ( рис. 1b ), и обычно ниже специфичность 14,16,17 . Для приложений редактирования генома идеальная технология встраивания ДНК позволила бы создавать программируемые, однонаправленные, независимые от рекомбинации и простые генные продукты вставки с минимальными компонентами и оборудованием минимального размера.Поэтому мы стремились разработать инженерную технологию CAST, сочетающую простоту и предсказуемость ориентации систем типа V-K с чистотой продукта систем типа I.

    Рисунок 1. Разработка и характеристика HELIX.

    a c , Схемы CAST типа I и типа V-K и HELIX (панели a c соответственно) и их механизмы транспозиции, которые приводят к простой вставке или коинтеграции генных продуктов. d , Рабочий процесс для экспериментов по транспозиции, нацеленных на плазмидные субстраты. e , Транспозиция оценивалась с помощью ПЦР соединения через LE/RE в TS1 в pTarget. Эксперименты проводили с nAniI, слитым с N- или С-концом TnsB, при использовании pDonor без сайтов I-AniI. f , Количественная оценка эффективности интеграции ДНК на плазмидах при использовании ShHELIX и донорной плазмиды с диапазоном расстояний (d) между сайтом I-AniI и LE/RE, оцененным с помощью ddPCR с использованием минипрепарированной ДНК. g , Покрытие ожидаемых продуктов вставки в pTarget из секвенирования с длинным чтением с использованием подмножества примерных простых чтений вставки для ShHELIX и чтений коинтеграции для ShCAST (покрытие из чтений коинтеграции ShHELIX и чтений простого вставки ShCAST опущено для простоты) . h , Распределение длины считывания при использовании ShCAST и ShHELIX с sgRNA, нацеленной на TS1 на pTarget, из данных секвенирования длительного считывания. Верхняя правая панель представляет собой увеличенное изображение пика длины считывания ~8000 п.н. i , Сравнение пропорций продуктов простой вставки и коинтеграции транспонированных продуктов для конструкций ShCAST и ShHELIX при использовании pDonor с сайтами I-AniI в 14 п.н. последовательность чтения. j , k , Чистота продукта транспозиции ( панель j ) и КОЕ ( панель k ) при использовании сайта Lib4 I-AniI на pDonor (с расстоянием 14 п.н. между сайтами Lib4 и LE/ RE), который, как было показано ранее, увеличивает аффинность I-AniI дикого типа в 5 раз.Для панелей f и k среднее значение, стандартное отклонение и отдельные точки данных показаны для n = 3. TSD, дублирование целевого сайта; LE и RE — левый и правый концы транспозона соответственно; sgRNA, одиночная направляющая РНК; ddPCR, капельная цифровая ПЦР.

    CAST типа I и типа V-K различаются по наличию или отсутствию субъединицы TnsA, соответственно, одно из основных отличий, определяющее их простую вставку для коинтеграции чистоты продукта. Как в транспозонах Tn7, так и в CAST типа I TnsA и TnsB выполняют реакции разрыва доноров 5 и 3 дюймов, соответственно, что приводит к простым вставкам посредством транспозиции «вырезать и вставить» (рис.1а ). В транспозонах Tn5053 и CAST типа V-K, в которых отсутствует TnsA, а также в транспозонах Tn7 и модифицированных системах типа I с каталитически мертвым TnsA 17,20 только 3-дюймовый донорный разрыв происходит через TnsB. Доноры с одиночным надрезом приводят к значительной доле коинтегратных вставок за счет репликативной транспозиции вместо вырезания и вставки 21 ( Fig. 1b ). Таким образом, для создания коинтегративного типа V-K CAST мы предположили, что восстановление отсутствующей функции TnsA путем слияния ортогональной ДНК-никазы с TnsB позволит транспозицию «вырезать и вставить» через 5-дюймовые и 3-дюймовые надрезы донора (, рис.1с ). Идеальная никаза должна быть небольшой (чтобы добавить в систему минимальный размер кодирования), иметь предсказуемый участок разрыва и предпочтительность нити, обладать высокой специфичностью для предотвращения непреднамеренного разрыва на мишени или вне ее и функционировать в различных организмах для последующей разработки инструментов. и приложение. Потенциальные варианты включают никирование эндонуклеаз рестрикции 22 , никирование вариантов Cas 9,23,24 , каталитическую часть или полный фермент TnsA из CAST типа I или транспозонов Tn7 25 , или фаговые эндонуклеазы HNH 26 .Однако у каждого из них есть недостатки, касающиеся размера, специфичности последовательности и цепи и / или необходимых белок-белковых взаимодействий.

    Одним из семейств ферментов, соответствующих этим критериям, являются самонаводящиеся эндонуклеазы (HEs), которые представляют собой небольшие нуклеазы, способные генерировать DSB с относительно высокой специфичностью. LAGLIDADG HEs (LHE) были использованы для редактирования генома в бактериальных и человеческих клетках из-за их специфичности и их умеренной перепрограммируемости посредством белковой инженерии или химерной сборки 27 .LHE из Aspergillus nidulans (I-AniI) имеет небольшую кодирующую последовательность (254 аминокислоты), расщепляет асимметричную последовательность-мишень ДНК длиной 19 п. 28 (нАниИ). Кроме того, было показано, что гиперактивный вариант I-AniI, названный Y2 I-AniI, обладает в 9 раз большей аффинностью к родственному ему сайту-мишени 29 . Таким образом, мы предположили, что либо nAniI, либо Y2 nAniI могут быть слиты с TnsB, чтобы сделать возможным двойной разрыв на донорской плазмиде, необходимый для вставки ДНК путем вырезания и вставки с помощью CAST типа V-K (, рис.1с ). Вместе слияние nHE с TnsB вместе с остальными компонентами CAST образует комплекс CAST с большой последовательностью с помощью HE, или HELIX.

    Результаты

    Разработка и оптимизация HELIX

    Сначала мы определили, может ли nAniI адекватно заменить отсутствие TnsA в транспозоне V-K канонического типа из Scytonema hofmannii (ShCAST) 14 . Для этого мы сконструировали серию экспрессионных плазмид ShHELIX, каждая из которых содержала: (1) одну направляющую РНК (sgRNA), нацеленную на сайт-мишень 1 (TS1) на отдельной плазмиде-мишени (pTarget), (2) Cas12k, (3) TniQ, (4) TnsC и (5) nAniI, слитые с N- или C-концом TnsB (рис.1д ). Экспрессионные плазмиды ShCAST или ShHELIX котрансформировали донорной плазмидой (pDonor, содержащей груз размером 2,1 т.п.н.) с левым и правым концами транспозона (LE и RE соответственно) в штамм E. coli , несущий pTarget (, рис. 1d). ). Чтобы определить, произошла ли транспозиция при использовании слияний nAniI с TnsB, мы провели ПЦР соединения как LE, так и RE в pTarget на минипрепарированной ДНК из соскобленных колоний. Интересно, что слияние nAniI с N-концом TnsB поддерживало вставку ДНК под управлением РНК (рис.1е ). С-концевые слияния nAniI с TnsB не приводят к транспозиции, указывая на то, что С-концевой взаимодействующий с TnsC домен TnsB менее приспосабливается к слитым белкам 30 .

    Затем мы собрали восемь дополнительных донорных плазмид, несущих переменные расстояния между LE/RE и сайтом-мишенью I-AniI (ориентированных на создание 5-дюймового никеля на pDonor) ( Рис. 1f ). При совместной трансформации экспрессионных плазмид ShCAST или ShHELIX (с N-концевым слиянием nAniI-TnsB) вместе с pDonor в наш штамм pTarget мы наблюдали одинаковое количество трансформантных колоний при использовании конструкций ShCAST и ShHELIX, что указывает на отсутствие дефекта жизнеспособности клеток из-за HELIX. ( доп.рис. 1а ). Мы оценили эффективность интеграции с помощью капельной цифровой ПЦР (ddPCR), а с помощью ShHELIX мы наблюдали диапазон эффективности интеграции при различных интервалах на pDonor, при этом интервал 14 п.н. обеспечивал наивысшую интеграцию (, рис. 1f, ). Удивительно, но ShCAST также продемонстрировал переменную эффективность интеграции в зависимости от расстояния между сайтом I-AniI и LE/RE (где, в отличие от ShHELIX, сайт I-AniI не играет роли в транспозиции). Интервалы в 4–12 п.н. на pDonor приводили к значительно более высокой эффективности вставки, чем pDonor без сайтов I-AniI ( Sup.рис. 1b ). Изменение положения сайта I-AniI модифицирует последовательность, непосредственно примыкающую к LE/RE на pDonor, что позволяет предположить, что состав фланкирующей последовательности, особенно первые 12 п.н., может быть важным фактором, определяющим эффективность интеграции ( Sup. Fig. 1б ). Отдельно мы также провели эксперименты по интеграции с использованием Y2 nAniI, слитого с TnsB (Y2 ShHELIX), и наблюдали значительно меньше колоний с пиковыми числами с использованием интервала 14 п.н. ( суп. рис. 3а и суп.1 ). Для последующих экспериментов использовали конструкции HELIX со слияниями nAniI-TnsB и pDonors с 14 п.н. между сайтами I-AniI и LE/RE.

    Затем мы использовали секвенирование с длительным чтением, чтобы оценить, может ли восстановление 5-дюймового никеля на pDonor с помощью ShHELIX улучшить чистоту продукта по сравнению с каноническим ShCAST. Мы обогатили транспонированные продукты из нашего минипрепарированного плазмидного пула (, суп. рис. 2, ), линеаризовали обогащенную плазмидную ДНК и выполнили секвенирование с длительным считыванием, чтобы определить долю простых вставок в коинтегратах (, рис.1г-1и ). С ShCAST мы наблюдали 19,39% коинтеграций, что согласуется с предыдущими результатами 6 ( рис. 1i ). Поразительно, что ShHELIX почти полностью исключил коинтеграты, что привело к сокращению всего продукта до 0,6% (уменьшение в 32 раза по сравнению с ShCAST; , рис. 1h, и , 1i, ). Кроме того, мы не наблюдали сайты I-AniI в считываниях продукта вставки, предполагая, что 5-дюймовый лоскут, содержащий эти последовательности, удаляется во время разрешения HELIX-опосредованной транспозиции.Мы также выполнили длинное секвенирование с Y2 ShHELIX и аналогичным образом наблюдали резкое увеличение чистоты продукта простой вставки (, суп. рис. 3b-d, ).

    Мы также провели серию контрольных экспериментов, чтобы дополнительно охарактеризовать ShHELIX ( Sup. Note 2 ). Во-первых, каталитически аттенуированный вариант I-AniI (K227M, Q171K) уменьшал коинтеграцию в 1,8 раза по сравнению с ShCAST (предположительно из-за неполной инактивации надрезов I-AniI) ( Sup. Fig. 4a ). Во-вторых, pDonor без целевого сайта I-AniI приводил к 1.7-кратное снижение коинтегратов по сравнению с ShCAST ( суп. рис. 4а ). Затем эксперименты с использованием pDonor с «перевернутым» сайтом I-AniI, который размещает разрыв на той же цепи, что и разрыв TnsB, привели к 10-кратному снижению коинтегратов (, суп. рис. 4b, ). Промежуточное образование шпильки или индуцированное поражением промежуточное расщепление Шапиро (в дополнение к возможности низкоуровневой DSB-опосредованной эксцизии груза) могут иметь место, что приводит к образованию продуктов простой вставки ( Sup.Рис. 4с ). Наконец, использование сайта I-AniI «Lib4» на pDonor-14, ранее обнаруженное для увеличения аффинности I-AniI дикого типа в 5 раз 31 , дополнительно уменьшило коинтеграции по сравнению с ShHELIX до 0,23% всех продукты транспозиции (по уменьшению коинтегратов в 84 раза по сравнению с ШКАСТ) ( рис. 1к ). Однако это улучшение чистоты продукта также сопровождалось снижением КОЕ (, примечание 1, и , рис. 1k, ). В целом, ShHELIX в сочетании с сайтом I-AniI, ориентированным на pDonor для создания 5-дюймового разрыва, демонстрирует наиболее заметное увеличение доли простой вставки до процента коинтеграции, что приводит к почти идеальной чистоте продукта на плазмидной мишени.

    Характеристика HELIX на геномных мишенях

    Воодушевленные нашими результатами транспозиции на плазмидные мишени, мы затем исследовали эффективность ShHELIX-опосредованной интеграции ДНК в геномные сайты. Мы выполнили трансформации с использованием конструкций, сходных с экспериментами по нацеливанию плазмид, но вместо этого с sgRNAs, нацеленными на геном, и без pTarget (, рис. 2a, ). Во-первых, мы проверили влияние двух аминокислотных линкеров разной длины между nAniI и TnsB на эффективность геномной интеграции в нашем наборе из восьми донорных плазмид, содержащих различные расстояния между сайтами I-AniI и LE/RE.Эксперименты проводились с ранее охарактеризованной sgRNA 14 против геномного сайта-мишени (TS2). Для обоих аминокислотных линкеров мы наблюдали самую высокую эффективность интеграции при расстоянии 14 п.н. между сайтом I-AniI и LE/RE (, рис. 2b, ), что согласуется с нашими результатами нацеливания плазмиды. Все обнаруживаемые вставки были в ориентации T-LR (, рис. 2c, ).

    Рисунок 2. Характеристика вставок ДНК на геномных мишенях с помощью HELIX.

    a , Рабочий процесс для экспериментов по транспозиции генома. b , Эффективность интеграции при использовании двух разных аминокислотных линкеров между nAniI и TnsB, sgRNA против геномного сайта-мишени 2 (TS2) и набора из восьми донорных плазмид с различными расстояниями между сайтами I-AniI и LE/RE , как определено с помощью ddPCR. c , Процент ориентации вставки при использовании ShCAST или ShHELIX, нацеленного на TS2, и с использованием pDonor с интервалом 14 п.н. между сайтом I-AniI и LE/RE d , Эффективность интеграции в шести геномных целевых сайтах для ShCAST и ShHELIX (слева панель) и относительную интеграцию с ShHELIX, нормализованную по ShCAST (правая панель), оцененную с помощью ddPCR. e , Охват ожидаемых продуктов вставки в геном (TS2) в результате секвенирования с длинным считыванием с использованием подмножества типовых простых чтений вставки для ShHELIX и чтений коинтеграции для ShCAST (покрытие из чтений коинтеграции ShHELIX и чтений простых вставок ShCAST опущено для простоты). Транспонированные продукты были обогащены перед секвенированием с помощью целевого обогащения Cas9. f , Распределение длины считывания продуктов транспозиции при использовании ShCAST и ShHELIX на геномном целевом сайте 2 (TS2) из ​​данных секвенирования длительного считывания.Верхняя правая панель представляет собой увеличенное представление пика длины считывания ~8200 п.н. г , Сравнение пропорций продуктов простой вставки и коинтеграции при TS2 для ShCAST и ShHELIX, оцененных с помощью секвенирования с длительным чтением. h , Эффективность интеграции с ShHELIX и sgRNA, нацеленной на TS5, при использовании pDonors, кодирующих грузы различных размеров. Интеграцию оценивали с помощью ddPCR. Для панелей b, d и h среднее значение, стандартное отклонение и отдельные точки данных показаны для n = 3.LE и RE — левый и правый концы транспозона соответственно; sgRNA, одиночная направляющая РНК; ddPCR, капельная цифровая ПЦР.

    Определив оптимальный сайт I-AniI для расстояния между LE/RE на pDonor для нацеливания на геном, мы затем сравнили эффективность интеграции и чистоту продукта ShCAST и ShHELIX для ряда геномных сайтов. ShHELIX сохранил надежную целевую интеграцию под управлением РНК в шести геномных сайтах-мишенях на уровнях, сравнимых с ShCAST (, рис. 2d, ). Чтобы проанализировать чистоту продукта интеграции HELIX при нацеливании на геном в TS2, мы выполнили секвенирование с длительным считыванием с использованием целевой стратегии обогащения Cas9 32 .Анализ считываний, обогащенных мишенью, при использовании ShCAST и ShHELIX, которые содержали или не содержали вставку груза, показал, что эффективность интеграции, рассчитанная на основе наших данных секвенирования с длинным считыванием, была аналогична нашим результатам ddPCR на TS2 ( Sup. Fig. 5 ). С помощью ShCAST мы наблюдали, что 46,52% прочтений вставок были коинтегрированными (, рис. 2e-g ), что в целом ниже, чем наблюдалось ранее, хотя и в отношении другого целевого сайта и с помощью альтернативных методов секвенирования длинных прочтений 17 .С ShHELIX мы наблюдали только 3,11% коинтегратов, что в 17 раз меньше по сравнению с ShCAST (, рис. 2e-g, ).

    Затем мы оценили способность ShHELIX интегрировать ДНК-грузы различных размеров. Мы выполнили трансформации, используя донорные плазмиды, несущие грузы последовательности 5,2, 7,8 или 9,8 т.п.н. (по сравнению с pDonor с грузом 2,1 т.п.н., использованным в предыдущих экспериментах). Для каждой реакции транспозиции с использованием более крупных грузов ShHELIX продемонстрировал сравнительно высокую эффективность целевой интеграции ДНК независимо от размера груза (рис.2ч ). В совокупности наши результаты демонстрируют, что ShHELIX способен к высокоактивным однонаправленным вставкам ДНК путем вырезания и вставки и нечувствителен к грузам размером не менее 10 т.п.н.

    Минимизация архитектуры ShCAST и HELIX

    В отличие от многокомпонентной сложности CAST типа I, для которой требуется семь или восемь белковых субъединиц различной стехиометрии, мы задались вопросом, можем ли мы еще больше упростить обычно 4-субъединичную архитектуру CAST типа V-K. . Для этого мы разработали трехкомпонентные системы, исследуя слияния различных субъединиц ShCAST.Мы исследовали слияние одного или двух мономеров TniQ с N- или C-концом Cas12k или слияние одного мономера TnsC с любым концом Cas12k (, рис. 3a, ). Слияние либо TniQ, либо TnsC с N-концом Cas12k существенно снижает эффективность интеграции (, рис. 3b, ). C-концевые слияния TniQ с Cas12k сохраняли эффективность интеграции до 62,3% и 69,6% по сравнению с неконденсированным ShCAST, когда были слиты один или два мономера TniQ соответственно ( рис. 3b и Sup.рис. 6а ). Мы также наблюдали, что слияние мономера TnsC с C-концом Cas12k сохраняет относительно высокую эффективность интеграции (, рис. 3b, ). Учитывая предполагаемую критическую роль образования филаментов TnsC для транспозиции 30,33-35 , мы предполагаем, что филаментация все еще может происходить, несмотря на слияние Cas12k, или что только одного мономера достаточно для обеспечения транспозиции через неканонический механизм ( Приложение 3 ).

    Рис. 3. Эффективность интеграции трехкомпонентных систем CAST и HELIX.

    a , Схема архитектур слияния для создания 3-х компонентных ШКАСТов. b , Эффективность интеграции, нормализованная к канонической, 4-компонентной системе ShCAST для каждой 3-компонентной системы ShCAST, как определено с помощью ddPCR (см. Sup. Fig. 6a для абсолютных уровней интеграции). c , Схема трехкомпонентных систем ШХЕЛИКС. d , Эффективность интеграции, нормализованная для 4-компонентной системы ShHELIX для каждой 3-компонентной системы ShHELIX (см. Sup. Fig. 6b для абсолютных уровней интеграции).Для панелей b и d среднее значение, стандартное отклонение и отдельные точки данных, показанные для n = 3.

    Затем мы определили, были ли аналогичные слияния Cas12k аналогичными функциональными в контексте трехкомпонентных систем HELIX ( рис. 3с ). Мы выполнили преобразования с использованием слияний Cas12k-TniQ, Cas12k-TniQ-TniQ или Cas12k-TnsC вместе с оставшимися модулями HELIX и оценили эффективность интеграции. Мы наблюдали РНК-управляемую интеграцию между 22-36% при TS2 и 15-49% при TS5 в зависимости от используемой архитектуры слияния (рис.3d и доп. рис. 6b ). Секвенирование ампликонов следующего поколения показало, что 4- и 3-компонентные системы ShCAST и ShHELIX демонстрируют один и тот же профиль расстояния вставки PAM-LE (, суп. рис. 7, ), показывая, что слияния nAniI-TnsB и слияния TniQ или TnsC Cas12k, отдельно или в сочетании, не изменяет это свойство. Эти результаты демонстрируют возможность создания систем HELIX с меньшим количеством субъединиц путем слияния компонентов и подчеркивают возможности белковой инженерии для создания трехкомпонентных версий, демонстрирующих сопоставимую эффективность интеграции.

    Расширяемость HELIX для ортологов CAST типа V-K

    Во всех обнаруженных CAST типа V-K отсутствует TnsA 36 . Это наблюдение поддерживает эволюционную гипотезу о том, что Tn5053-подобный транспозон, содержащий TnsB, TnsC и TniQ, но не TnsA, ассимилировал и перепрофилировал эту систему CRISPR 19 . Следовательно, ожидается, что все CAST типа V-K будут действовать посредством репликативной транспозиции, приводя к существенной доле нежелательных продуктов коинтеграции. Таким образом, мы исследовали HELIX в качестве универсального подхода, позволяющего вставлять ДНК методом вырезания и вставки с другими V-K CAST различных типов (, рис.4а ).

    Рис. 4. Расширение HELIX для ортологов типа V-K CAST.

    a , Филогенетическое дерево, иллюстрирующее разнообразие последовательностей TnsB из недавно идентифицированных CAST типа V-K 36 CAST, использованных в настоящем исследовании, а также Tn5053, отмечены. b , конструкции sgRNA для AcCAST. c , Эффективность интеграции с AcCAST с использованием двух конструкций sgRNA (из панели b ) и донорной плазмиды либо с нативной фланкирующей последовательностью (как сообщалось ранее 14 ), либо с фланкирующей последовательностью ShCAST, оцененной с помощью ddPCR. d . Схема AcHELIX с фланковой последовательностью ShCAST из 14 п.н. на pDonor. e , Охват продуктов вставки в геном (TS2) в результате секвенирования с длинным считыванием, отображающий выборку типичных простых считываний вставок для AcHELIX и чтений коинтеграции для AcCAST (покрытие из чтений коинтеграции AcHELIX и чтений простой вставки AcCAST опущено для простоты). Транспонированные продукты были обогащены перед секвенированием с помощью целевого обогащения Cas9. f , Распределение длины считывания продуктов транспонирования при использовании AcCAST и AcHELIX на TS2 из данных секвенирования длительного считывания.Верхняя правая панель представляет собой увеличенное представление пика длины считывания ~8,3 т.п.н. г , Сравнение пропорций продукта простой вставки и коинтеграции для AcCAST и AcHELIX, оцененное с помощью секвенирования с длительным чтением. h , i , Эффективность интеграции в ориентациях T-LR и T-RL (панели h и i соответственно) в шести геномных целевых сайтах для AcCAST и AcHELIX, оцененная с помощью ddPCR. На панели h эффективность интеграции AcHELIX T-LR по сравнению с AcCAST показана на правой панели.Все трансформации содержат вариант pDonor с флангами ShCAST и интервалом 14 п.н. между сайтами nAniI и LE/RE. j , Эффективность интеграции при использовании AcHELIX с использованием sgRNA, нацеленной на TS6, и pDonors, кодирующих грузы различных размеров, оценивали с помощью ddPCR. k , схема ShoHELIX с фланковой последовательностью ShCAST из 14 п.н. на pDonor. l , Покрытие ожидаемых продуктов вставки в геном (TS2) в результате секвенирования с длинным считыванием, отображающее выборку типичных простых считываний вставок для ShoHELIX и считываний коинтеграции для ShoCAST (покрытие считываний коинтеграции ShoHELIX и простой вставки ShoCAST чтения опущены для простоты).Транспонированные продукты были обогащены перед секвенированием с помощью обогащения мишени Cas9. m , Распределение длины чтения при использовании ShoCAST и ShoHELIX на геномной мишени (TS2) из ​​данных секвенирования длительного чтения. n , Сравнение пропорций продуктов для простой вставки и совместной интеграции для ShoCAST и ShoHELIX, оцененное с помощью секвенирования с длительным чтением. o , p , Эффективность интеграции в ориентациях T-LR и T-RL (панели o и p соответственно) в шести геномных целевых сайтах для ShoCAST и ShoHELIX, оцененная с помощью ddPCR. q , Эффективность интеграции при использовании ShoHELIX с sgRNA, нацеленной на TS3, и pDonors, кодирующих грузы различных размеров, оценивалась с помощью ddPCR. Все трансформации ShoCAST и ShoHELIX содержат вариант pDonor с флангами ShCAST. Для панелей c, h j и o q , среднее значение, стандартное отклонение и отдельные точки данных показаны для n = 3. LE и RE, левый и правый концы транспозона, соответственно; sgRNA, одиночная направляющая РНК.

    Чтобы исследовать применимость HELIX к другим ортологам CAST, мы охарактеризовали и оптимизировали два ранее опубликованных CAST типа V-K либо из Anabaena cylindrica (AcCAST), либо из другого штамма Scytonema hofmannii (ShoCAST).Во-первых, для канонической системы AcCAST мы разработали два каркаса sgRNA (, рис. 4b, ) и две архитектуры pDonor, последние из которых различались содержанием различных последовательностей длиной 25 п. или с использованием фланкирующих последовательностей ShCAST). С двумя конструкциями sgRNA, которые различались в зависимости от их точек слияния crRNA-tracrRNA, мы наблюдали лишь скромную разницу в эффективности интеграции (, рис. 4b, и , 4c, ).Однако pDonor, содержащий фланкирующие последовательности ShCAST, приводил к увеличению абсолютной эффективности интеграции на 19,6% или 20,4% для sgRNA-1 и sgRNA-2 соответственно (увеличение в 1,28 и 1,31 раза по сравнению с pDonor с нативными флангами AcCAST; Рис. 4c). ). Как мы ранее наблюдали для ShCAST ( Sup. Fig. 1b ), эти результаты предполагают, что последовательности, непосредственно прилегающие к LE и RE на pDonor, являются важной детерминантой эффективности CAST-опосредованной интеграции типа V-K. Принимая во внимание последовательности флангов, а также другие потенциальные детерминанты эффективности интеграции, такие как количество копий pDonor ( Sup.Рис. 8 ), позволяют оптимизировать различные CAST. Кроме того, AcCAST показал минимальное, хотя все еще обнаруживаемое, количество вставок, ориентированных на T-RL, что делает его почти полным однонаправленным вставочным устройством (, рис. 4b, ).

    Мы сконструировали AcHELIX, включающий гибрид nAniI-TnsB вместе с конструкцией sgRNA-2 и pDonor, содержащий сайты I-AniI в 14 п.н. от LE/RE, разделенные фланкирующей последовательностью ShCAST (, рис. 4d, ). Чтобы определить чистоту продукта интеграции с AcHELIX по сравнению с AcCAST при нацеливании на геном, мы выполнили секвенирование с длительным считыванием после обогащения мишени Cas9 (рис.4е ). В то время как с AcCAST мы наблюдали 37,83% продуктов коинтеграции, для AcHELIX мы обнаружили только 0,71%, что представляет собой 53-кратное улучшение чистоты продукта с AcHELIX (, рис. 4f, и , 4g, ). В шести геномных мишенях AcHELIX сохранил сравнимую с AcCAST интеграцию ДНК под управлением РНК и направленность вставки (, рис. 4h, и , 4i, ). Кроме того, как и ShHELIX, AcHELIX не продемонстрировал снижения эффективности при интеграции грузовых последовательностей различных размеров до 9.8 КБ, сохраняя эффективность интеграции более 83 % для всех четырех размеров груза в TS6 (, рис. 4j, ). Таким образом, подобно ShHELIX, AcHELIX представляет собой эффективный сконструированный CAST с почти идеальной чистотой продукта простой вставки для вставок ДНК различных размеров.

    Затем мы охарактеризовали ShoCAST и ShoHELIX с использованием pDonor с интервалом 14 п.н., разделяющим сайт I-AniI, и LE/RE с фланкирующей последовательностью ShCAST (, рис. 4k, ). Мы провели эксперименты по нацеливанию генома с помощью ShoCAST и ShoHELIX, используя ранее описанную sgRNA 16 против TS2.Характеристика продуктов вставки с помощью длительного секвенирования выявила 54,61% коинтегратов для ShoCAST и 20,54% для ShoHELIX, демонстрируя 2,6-кратное снижение коинтегратов при использовании ShoHELIX (, рис. 4l-4m ). Для геномных мишеней TS2-TS7 мы наблюдали диапазон эффективности интеграции, при этом ShoHELIX демонстрировал сопоставимую интеграцию с ShoCAST (, рис. 4o, ). Подобно AcCAST и AcHELIX, направленность вставок ShoCAST и ShoHELIX была преимущественно в ориентации T-LR, хотя и с минимальными, но обнаруживаемыми вставками T-RL (рис.4о и ). Кроме того, в отличие от ShHELIX и AcHELIX, ShoHELIX показал снижение эффективности интеграции с увеличением размера груза на pDonor при TS3 (, рис. 4q, ).

    Обсуждение

    CAST — новый класс технологий редактирования генома, которые позволяют программировать вставки ДНК без использования рекомбинации, специфичных для последовательности рекомбиназ или DSB. Однако обнаруженные и охарактеризованные в настоящее время системы типов I и V-K имеют ограничения, ограничивающие простоту их использования, в том числе размер ( Sup.рис. 9 ), стехиометрическая сложность и сложность компонентов и/или чистота продукта введения. Чтобы преодолеть эти ограничения, мы разработали HELIX, которая использует технологические преимущества CAST типа V-K и использует слияние nHE и модифицированную донорную плазмиду для достижения программируемой и эффективной вставки ДНК путем вырезания и вставки, аналогичной CAST типа I. Мы показываем, что HELIX резко увеличивает чистоту продукта простой вставки на плазмидных и геномных мишенях в E. coli и сохраняет надежную транспозицию под управлением РНК на уровне дикого типа или близком к нему.Кроме того, мы показываем возможность упрощения систем CAST и HELIX до трехкомпонентных систем путем слияния субблоков с Cas12k, полезность которых будет улучшена будущими инженерными усилиями по повышению эффективности их интеграции. Вместе наши подходы являются первым описанием технологии CAST и подчеркивают, как можно использовать другие встречающиеся в природе ферменты для улучшения свойств CAST.

    Мы демонстрируем, что HELIX эффективен для трех ортологов CAST типа V-K, подтверждая универсальность этого подхода.Продолжающееся открытие CAST не только позволит выявить новые системы с полезными характеристиками, но и создаст платформу для разработки технологий HELIX следующего поколения с разнообразными и полезными свойствами. Продолжающееся метагеномное открытие CAST выявило множество архитектур транспозонов с рядом свойств, включая компактные CAST Type V-K, которые могут оказаться полезными для приложений редактирования генома 36 . Оптимизация свойств HELIX для каждого ортолога CAST (например, аминокислотные линкеры, промежутки между сайтами nHE и LE/RE, выбор nHE, донорные фланкирующие последовательности и т. д.) приведет к более высокой эффективности транспонирования при использовании уникальных свойств каждого CAST.

    Среди нашей характеристики CAST мы также обнаружили, что фланкирующее секвенирование, непосредственно примыкающее к LE/RE на pDonor, может влиять на эффективность интеграции. Это открытие предполагает, что будущие усилия по лучшему пониманию и увеличению фланкирующих последовательностей и потенциально других параметров CAST обещают дальнейшее повышение эффективности транспозиции. Более полное понимание факторов, определяющих эффективность интеграции CAST и HELIX и чистоту продукта (например,грамм. последовательности фланкирования донора, выбор целевого сайта, размер груза, более полное определение PAM и т. д.), а также специфичность будут иметь решающее значение при разработке и настройке этих систем.

    Подводя итоги, можно сказать, что HELIX представляет собой обобщающий подход, который обеспечивает программируемые, вырезающие и вставляемые, однонаправленные, минимальные компоненты и независимые от рекомбинации вставки ДНК без DSB. Усилия по созданию высокоспецифичных и гиперактивных вариантов CAST типа V-K, потенциально с помощью инженерии TnsC и Cas12k или TnsB и Cas12k соответственно, могут принести пользу системам HELIX следующего поколения.Параллельно с этим HELIX обладает потенциалом для расширения использования CAST для различных организмов, учитывая его улучшенную субъединицу, стехиометрию и простоту механизма вставки. В целом, HELIX демонстрирует перспективу применения инженерных подходов для оптимизации и преодоления ограничений CAST с последствиями для разработки оптимальных технологий вставки ДНК.

    Вклады

    C.J.T задумал идею, спроектировал и провел эксперименты, а также написал черновой вариант рукописи.Б.О. провел эксперименты для ShoHELIX и сравнения размеров груза. Б.П.К. участвовал в планировании эксперимента и руководил исследованием. CJT и B.P.K. отредактировали рукопись; все авторы одобрили рукопись.

    Конкурирующие интересы

    C.J.T. и B.P.K являются изобретателями патентов и/или патентных заявок, поданных Mass General Brigham, которые описывают технологии геномной инженерии. Б.П.К. является консультантом Avectas Inc., EcoR1 Capital и ElevateBio, а также советником Acrigen Biosciences, Life Edit Therapeutics и Prime Medicines.

    Доступность данных

    Все данные секвенирования будут храниться в архиве NCBI Sequence Read Archive (SRA).

    Методы

    Плазмиды и олигонуклеотиды

    Все плазмиды, использованные в этом исследовании, и выбранные последовательности перечислены в Дополнительной таблице 1 . Новые плазмиды были созданы с помощью изотермической сборки или сборки Golden Gate, некоторые из которых были депонированы с помощью Addgene (, дополнительная таблица 1 ). Плазмиды pHelper и pDonor для ShCAST и AcCAST, а также pTarget были подарены Feng Zhang (номера плазмид Addgene 127921, 127924, 127923, 127925, 127926).Для плазмид, кодирующих гРНК, спейсерные последовательности клонировали в плазмиды pCAST и pHELIX посредством сборки Golden Gate с SapI (New England Biolabs, NEB). Особенности сайта-мишени для всех гРНК, использованных в этом исследовании, приведены в дополнительной таблице 2 . Олигонуклеотиды и зонды, используемые в этом исследовании, были приобретены у Integrated DNA Technologies (IDT) и перечислены в дополнительной таблице 3 . Фрагменты гена для клонирования конструкции были заказаны в Twist Biosciences; синтетические sgRNA SpCas9 были заказаны у Synthego (, дополнительная таблица 2, ).

    Реакции транспозиции, направленные на плазмиды и геномные сайты

    Трансформации для экспериментов по нацеливанию плазмид проводили в химически компетентных клетках PIR1, содержащих pTarget (исходный штамм PIR1, полученный от Invitrogen), с использованием 25 нг pCAST или pHELIX и 25 нг pDonor. Трансформированные клетки восстанавливали в течение 1 часа при 37°C в S.O.C. и затем высевали на чашки с агаром LB, содержащие 50 мкг/мл канамицина, 25 мкг/мл хлорамфеникола и 100 мкг/мл карбенициллина. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 18 часов.Колонии подсчитывали, соскребали и экстрагировали плазмидную ДНК с помощью минипрепарата (Qiagen). Полученный пул плазмид использовали для последующего анализа с помощью соединительной ПЦР и секвенирования с длинным считыванием. ПЦР соединения анализировали с помощью капиллярного электрофореза QIAxcel (Qiagen) и визуализировали с помощью программного обеспечения QIAxcel ScreenGel (v1.5.0.16; Qiagen).

    Трансформации для экспериментов по нацеливанию генома выполняли с использованием клеток PIR1 (или клеток PIR2 (Invitrogen) для , суп. рис. 7 ) и 25 нг pCAST или pHELIX и 25 нг pDonor.Трансформированные клетки восстанавливали в течение 1 часа при 37°C в S.O.C. и затем высевали на чашки с агаром LB, содержащие 50 мкг/мл канамицина и 100 мкг/мл карбенициллина. Для трансформаций, включающих плазмиды ShCAST, ShHELIX, ShoCAST или ShoHELIX, планшеты инкубировали при 37°C в течение 18 часов; для трансформаций AcCAST и AcHELIX планшеты инкубировали при 37 °C в течение 24 часов из-за сравнительно меньших колоний (хотя их количество было приблизительно одинаковым). Колонии соскребали и гДНК собирали с использованием набора для очистки геномной ДНК Wizard (Promega) для последующего анализа с помощью ddPCR и секвенирования с длительным считыванием.

    Оценка эффективности интеграции с помощью ddPCR

    Плазмидную или геномную ДНК сначала нормализовали до 10 нг/мкл или 100 нг/мкл соответственно, а затем дополнительно разбавляли до 0,2 нг/мкл или 2 нг/мкл рабочих растворов соответственно для анализы ддПЦР. События вставки измеряли с использованием целевых праймеров и донор-специфического зонда (, дополнительная таблица 3, ). Реакции ddPCR содержали 20 пг плазмидной ДНК или 2 нг гДНК, 250 нМ каждого праймера, 900 нМ зонда и супермикс ddPCR для зондов (без dUTP) (BioRad) в 20 мкл реакций, а капли генерировали с использованием автоматического генератора капель QX200 ( БиоРад).Условия термоциклирования: 1 цикл (95 °С, 10 мин), 40 циклов (94 °С, 30 с, 58 °С, 1 мин), 1 цикл (98 °С, 10 мин), выдержка при 4°С. Продукты ПЦР анализировали с помощью устройства для считывания капель QX200 (BioRad), а абсолютное количество вставок определяли с помощью QuantaSoft (v1.7.4). Также анализировали общую матричную ДНК и рассчитывали эффективность интеграции по вставкам/матрице*100.

    Длинное секвенирование плазмид и геномных интеграций

    Чистоту продукта интеграции анализировали с помощью длинного секвенирования с использованием плазмид, полученных в результате реакций транспозиции плазмид.Транспонированные продукты обогащали путем электропорации примерно 100 нг плазмидного пула в электрокомпетентные клетки Endura (Lucigen), которые представляют собой не-PIR штамм, который ограничивает рекомбинацию. Клетки восстанавливали в течение 1 часа при 37°C в S.O.C. и распределяли по чашкам с агаром LB, содержащим 50 мкг/мл канамицина и 25 мкг/мл хлорамфеникола. Планшеты инкубировали при 30°C (для ограничения рекомбинации) в течение 24 часов, соскребали и экстрагировали плазмидную ДНК с помощью минипрепарата. Обогащенные плазмиды расщепляли EcoRV (NEB) в течение 8 часов при 37°С.Подготовка библиотеки для секвенирования без амплификации (Oxford Nanopore Technologies, SQK-LSK109) выполнялась с использованием набора для расширения штрих-кода (Oxford Nanopore Technologies, NBD-104). Окончательную объединенную библиотеку загружали в проточную кювету R9.4.1 и секвенировали в течение 24 часов.

    Для проведения длительного секвенирования целевых вставок генома мы выполнили протокол целевого обогащения Cas9 без амплификации для селективного улучшения секвенирования предполагаемых сайтов-мишеней (Oxford Nanopore Technologies, SQK-CS9109; sgRNA, перечисленные в дополнительной таблице ). 2 ).Полученную библиотеку загружали в проточную кювету R9.4.1 и секвенировали в течение 30 часов.

    Обработка данных долгосрочных результатов секвенирования

    Файлы Fast5 вызывались в режиме реального времени с помощью Miknow (v21.06.9) с моделью быстрого базового вызова, а полученные файлы FastQ были отфильтрованы для оценки Q > 8. BBDuk из Пакет BBTools 37 использовали для фильтрации ридов, содержащих 20 п.н. LE, RE и последовательность спейсера целевого сайта с максимальным расстоянием Хэмминга 2. Из этих прочтений те, которые содержат последовательность 20 п.н. (с максимальным расстоянием Хэмминга 2 ), обнаруженные в остове плазмиды (не ожидается, что они появятся в продуктах простой вставки), были классифицированы как потенциальные коинтеграты, а те, которые не содержат эту последовательность, были классифицированы как потенциальные простые вставки.Чтения для экспериментов по нацеливанию на плазмиду дополнительно отфильтровывали для соответствующей длины чтения. Чтения, содержащие продукты, назначенные как простые вставки или коинтеграции, были объединены в один файл FastQ и сопоставлены либо с синтетической простой вставкой, либо с продуктом коинтеграции с Minimap2 38 , указанным с параметром map-ont . Графики покрытия были созданы на основе примерного набора из 100 прочтений с использованием Geneious (v2021.2.2) и его встроенного выравнивателя (средняя чувствительность и повторение до 5 раз).Также были созданы файлы Sam, содержащие выровненные чтения, которые использовались для создания гистограмм длины.

    Анализ расстояния вставки с использованием целевого секвенирования

    Расстояние вставки от PAM до LE оценивали с помощью секвенирования следующего поколения с использованием метода конструирования библиотеки на основе двухэтапной ПЦР. 50 нг геномной ДНК из экспериментов по нацеливанию на геном подвергали ПЦР-амплификации с 30 циклами с использованием высокоточной ДНК-полимеразы Q5 (NEB) и праймеров, которые связываются сразу за пределами TS2 или сразу внутри LE.Продукты ПЦР очищали с использованием парамагнитных шариков, приготовленных, как описано ранее 39,40 . 20 нг очищенного продукта ПЦР использовали в качестве матрицы для второго 10-циклового ПЦР для добавления штрих-кодов Illumina и последовательностей адаптеров. Продукты ПЦР перед количественным определением очищали с помощью QuantiFluor (Promega) и объединяли в эквимолярный пул. Конечные библиотеки были количественно определены с помощью количественной ПЦР (набор для количественной оценки библиотек KAPA; Roche 7960140001) и секвенированы на MiSeq с использованием набора v2 на 300 циклов (Illumina).

    Обработка данных целевых результатов секвенирования

    Парные чтения FastQ были сначала отфильтрованы для Q>30 с использованием BBDuk из набора BBTools и объединены с помощью BBMerge.Затем были извлечены чтения, содержащие 20 п.н. TS2 и 20 п.н. терминального LE, каждое с максимальным расстоянием Хэмминга 1. Каждое чтение затем удаляли из последовательности выше и включая PAM и ниже и включая LE, в результате чего оставалась только последовательность между PAM и LE (т.е. сайт вставки). Длины результирующих прочтений были рассчитаны и использованы для построения профилей расстояния вставки PAM-LE.

    Благодарности

    Благодарим Л.Т. Хилле, C.R.R. Алвес и Р.A. Silverstein за предложения по рукописи, P.M. Boone за помощь с ddPCR и B.L. Стоддард за советом. C.J.T. был поддержан грантом № 2020295403 Национального научного фонда для аспирантов. BPK был поддержан стипендией Говарда М. Гудмана Mass General Hospital.

    Простое решение для кубка vk Квалификационный раунд 1 и 2

    Квалификационный раунд 1

    A 158A — Следующий раунд

    Просто сортировать. Обратите внимание на 0 в массиве.

    B 158B — Такси

    Выберите 3 и 1 как можно больше.И пусть 2 соединяются сами с собой. Если единиц и двоек больше, пусть две единицы объединяются с двойками, и каждые четыре единицы берут одно и то же такси.

    C 158C — Команды Cd и pwd

    Реализовать со стеком. Если строка начинается с ‘/’, пусть top = 0, иначе останется верх; Затем обработайте подстроку одну за другой, при встрече с «..» top—; иначе остаются верхними;

    D 158D — Ледяные скульптуры

    Количество ребер нового правильного многоугольника должно быть множителем данного многоугольника. Перечисление всех факторов занимает время O(sqrt(n)).Затем выберите лучшую точку за O (n). Таким образом, временная сложность составляет O (n * sqrt (n)).

    E 158E — Телефонные разговоры

    Это классическая проблема DP. Массив dp[i][j] обозначает минимальную крайнюю правую конечную точку при выборе не более чем j сегментов из первых i сегментов. dp[i][j] = dp[i][j] = min(dp[i-1][j-1], max(dp[i-1][j],left[i])+length[ я]). Когда массив dp будет заполнен, найдите максимальное значение left[i+1]-dp[i][k] и крайнюю правую точку — dp[n][k]. Всего взять O(n*n).

    Квалификационный раунд 2

    A 159A — Друзья или нет

    Сравните каждые две записи и найдите нужных друзей.Присвойте каждому имени уникальный номер, чтобы не засчитывать одного и того же друга дважды. Если a и b друзья, то пусть friend[a][b] = true.

    B 159B — Matchmaker

    Создать две хеш-таблицы подсчета количества размеров (скажем 2) выходящих в сетмейкеры и наборы кепок. Очевидно, что сумма минимального числа каждого размера в двух наборах является первым ответом. Аналогичным образом создайте две хеш-таблицы, чтобы подсчитать числа одного размера и одного цвета. Хэш-функция может быть хэш (цвет, размер) = цвет * 1000 + размер.

    C 159C — String Manipulation 1.0

    Поскольку длина строки не превышает 100*2000, мы можем построить 26 деревьев строк-сегментов для подсчета 26 латинских букв. Способ построить дерево и найти позицию K-й буквы довольно прост, если вы понимаете, что такое линия-сегмент-дерево 🙂

    D 159D — Пары палиндромов

    Метод dp действительно хорош~ , sum[i] стоит для номера строки палиндрома в первых i буквах. palindrome[i][j] оценивает подстроку i…j — строка-палиндром. dp[i] — это ответ на первые i букв. dp[i] = dp[i-1]+Sum( палиндром[j][i]*sum[j-1] ) для всех j<=i && j>0 . сумма[i] = сумма[i-1]+Sum(палиндром[j][i]) для всех j<=i.

    E 159E — Zebra Tower

    отсортировать массив с условием сравнения (cube[i].color < cube[j].color ||(cube[i].color==cube[j].color && cube[i ].size>куб[j].size)). Затем для первых i кубов существует массив Max_cube, Max_cube[j] записывает максимальную сумму размеров j кубов одного цвета.Кубу i+1, если это k-й наибольший размер своего цвета. Сравните ответ с кубом[i+1].size + max(Max_cube[k],Max_cube[k+1],Max_cube[k-1]). Временная сложность O(n*logn).

    Простите мой плохой английский 🙂

    гл и хф сегодня вечером!

    Ключ к последовательности, усилия должны продолжаться: д-р В. К. Пол о подвиге вакцины Covid на 1 миллиард | Последние новости Индия

    Заявив, что более 75 процентов взрослых получили свою первую дозу вакцины, д-р Пол сказал, что еще 25 процентов подходящих бенефициаров еще не вакцинированы бесплатно.

    Член Niti aayog (здравоохранение) д-р В. К. Пол в четверг подчеркнул важность последовательности, поздравив нацию с достижением исторической вехи — введением 100 крор или одного миллиарда доз вакцин против коронавируса (Covid-19).

    Доктор Пол, одно из ключевых лиц правительства в его борьбе с пандемией, сказал, что было замечательно совершить подвиг всего за девять месяцев, поскольку кампания по вакцинации для сдерживания вируса началась в январе этого года.

    На момент публикации статьи было введено 1 00 04 12 900 доз, из которых 18 82 572 были введены в четверг. Правительство поставило цель вакцинировать рекордные 2,5 крор бенефициаров в течение дня.

    Чуть более 30% индийцев вакцинированы обеими дозами, около 10 крор человек в настоящее время просрочены, они должны были получить 2-ю дозу, но они этого не сделали. Это незавершенная работа, которую мы должны выполнить, и отправить напоминания этим людям о необходимости принять вторую дозу: Dr VK Paul pic.twitter.com/pXnds9TU0M

    — АНИ (@ANI) 21 октября 2021 г.

    Заявив, что более 75 процентов взрослых получили свою первую дозу вакцины, д-р Пол сказал, что еще 25 процентов лиц, имеющих право на получение помощи, еще не получили бесплатную вакцинацию.

    Кроме того, немногим более 30 процентов населения Индии были привиты обеими дозами вакцин, в то время как еще 10 крор должны сделать вторую прививку. Назвав это незавершенной работой, которую необходимо выполнить, д-р Пол сказал, что усилия должны продолжаться.

    «Поздравляю жителей и работников здравоохранения Индии. Удивительно, что для любой страны достигнута отметка в 1 миллиард доз, достижение всего за 9 месяцев с момента начала программы вакцинации в Индии», — цитирует доктора Пола информационное агентство ANI .

    Между тем, правительство Союза заявило, что на сегодняшний день штатам и территориям Союза поставлено более 103,5 крор доз вакцины. Более 10,85 крор остатков и неиспользованных доз вакцины все еще доступны в штатах и ​​UT.

    Подпишитесь на наши лучшие новости

    Подписка на информационный бюллетень прошла успешно

    Благодарим вас за подписку на нашу рассылку Daily News Capsule.

    Закрыть историю .